安石榴苷体外抑菌及体内抗沙门氏菌感染的作用及机理研究

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1、安石榴苷体外抑菌及体内抗沙门氏菌感染的作用及机理研究-->第一章文献综述1.1石榴概述石榴皮是石榴的干燥果皮，研究表明石榴皮具有降血脂、抗病毒、抗氧化、抗腹泻、抗肿瘤及抗菌等生理活性（热依木古丽·阿布都拉等2013）。石榴皮具有丰富的多酚类物质，约为石榴皮干重量的10%～20%，其组分为安石榴苷、没食子酸、表儿茶素、石榴皮亭A、石榴皮亭B、鞣花酸等，其中安石榴苷含量最高（杨筱静等2013）。石榴皮占石榴的20%～30%，除少数药用外，绝大部分却没有被充分的利用，几乎被废弃，造成资源的极大浪费。目前，石榴皮的应用主要集中在食品、药品、日化用品和功能高分子材料

2、等方面。......1.2安石榴苷概况1.2.1结构特性及安石榴苷（2,3-(S)-hexahydroxydiphenoyl-4,6-(S,S)-gallagyl-Dglucose）是一种多羟基的酚类化合物，分子式为C48H27O30，分子量为1084.72。安石榴苷为棕褐色粉末，易溶于水，乙醇和甲醇等，属于水解性单宁。安石榴苷的化学结构式如图1-1所示。安石榴苷主要存在于石榴科植物中，为石榴的主要活性成分之一，分布于石榴的皮、籽和汁中（孟祥乐等2014）；安石榴苷具有同分异构体，分别为α型和β型（见图1-1）。安石榴苷为石榴皮中含量最高的鞣花酸单宁，占石

3、榴皮干果重的5%-15%（张杰等2014）；受气候、品种和管理水平等的影响，不同地区的石榴皮中安石榴苷的含量会有所差异。1.2.2生理活性功能1.2.2.1抗氧化作用安石榴苷具有酚羟基的结构，是石榴皮多酚中起关键抗氧化作用的成分。体外研究表明，安石榴苷具有较强的清除超氧阴离子自由基（O2-）、ABTS·自由基、DPPH·自由基以及H2O2的能力；另外，安石榴苷对脂质的过氧化具有一定的抑制作用（Aqiletal.2012；Seerametal.2005；Kulkarnietal.2004；梁俊等2012）。1.2.2.2抗病毒作用安石榴苷对单纯疱疹1型病毒、

4、巨细胞病毒、丙型肝炎病毒、革登病毒、麻疹病毒和呼吸道合胞病毒等具有抑制作用，其机理主要是干扰病毒与细胞表面的氨基多糖（GAGs）的相互作用（Linetal.2013）。另外，Yangetal.（2012）通过小鼠实验证明安石榴苷能降低肠病毒71引起的细胞病变，降低小鼠的死亡率并减轻肠病毒感染小鼠的临床症状。1.2.2.3抗菌作用研究表明，安石榴苷具有抑制多种食源性致病菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和弧菌）的能力，其最小抑菌浓度（MIC）范围为45μg/ml~3200μg/ml（Tagurietal.2004）。其次，安石榴苷对真菌（Alternar

5、iaalternata,Penicilliumdigitatum,Penicilliumexpansum等）也具有较强的抑制作用（Glazeretal.2012）。另外，Lietal.（2014）表明富含安石榴苷的石榴皮提取物对单核增生李斯特菌具有抑制作用，其机理为富含安石榴苷的石榴皮提取物破坏单核增生李斯特菌细胞膜的结构，使胞内的紫外物质、钾离子和ATP释放到胞外，细胞膜电势和胞内外pH值差也发生改变；另外，李斯特菌的菌体形态也发生了变化。1.2.2.4护肝作用Linetal.（1998，2001）研究表明安石榴苷对四氯化碳或乙酰氨基酚诱导的小鼠肝损伤具

6、有治疗作用；安石榴苷能够降低肝损伤小鼠血清中谷草转氨酶和谷丙转氨酶的含量，并能减轻四氯化碳或乙酰氨基酚对小鼠所造成的肝中央静脉病理病变以及氧化损伤。1.2.2.5抗炎作用在炎症反应的过程中，安石榴苷能够抑制巨噬细胞RAAPK和NF-κB通路的激活（Xuetal.2014）。另外，安石榴苷能抑制CD4+T细胞合成IL-2，并通过动物实验表明安石榴苷能够抑制丙二醇甲醚醋酸酯诱导的小鼠耳部慢性水肿或者角叉菜胶诱导的鼠急性足爪肿胀（Leeetal.2008；Linetal.1999）。第二章石榴皮中抑菌活性物质的筛选石榴（punicagranatumL.）为石榴科

7、、石榴属植物，是传统的药食两用植物之一，具有极高的营养价值和药用价值；研究表明，石榴具有涩肠止泻、抗氧化、抗病毒、抗癌等功能（Jurenka2008；Migueletal.2010）。目前，国内外对石榴皮抑菌活性的研究主要集中在石榴皮粗提物抑菌方面，而石榴皮中起抑菌作用的主要成分还未见报道（Malviyaetal.2014；Finegoldetal.2014；董周永等2008a和2008b）。因此，本章以食品中常见的致病菌为供试菌，研究石榴皮中主要的成分对致病菌的抑制效果，确定石榴皮中起主要抑菌作用的活性成分，为石榴皮的开发利用奠定理论基础。......2

8、.1材料与方法2.1.1材料蛋白胨缓冲液（BPCC54004：购于