纤维素酶用于山茱萸提取的初步研究论文

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1、纤维素酶用于山茱萸提取的初步研究论文王新胜，吴艳芳，黄年华【摘要】目的对酶法提取山茱萸总皂苷的酶解条件进行了初步研究，考察了酶解时间、酶用量、酶解温度和酶解初始pH值对总皂苷产量的影响。方法采用紫外可见分光光度法测定总皂苷含量，检测波长为554nm。结果确定了酶解的最优条件为:酶解时间为150min,.freelFructusCornieent.Theinfluenceofenzymolysistime,enzymeamount,enzymolysistemperature,andpHoftheenzymesolutioninedbyUV-spec

2、trophoto-metry.ResultsTheexperimentshoumprocess:enzymolysistimein，enzymeamountolysistemperatureesolutionFructusCornicanbeimprovedbycelluloseenzymetreatment.Keye；Extraction山茱萸为山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalisSieb.etZucc的干燥成熟果肉.freell圆底烧瓶中，酶解，反应一定时间后取出趁热过滤，收集滤夜，浓缩蒸干后，用甲醇溶解定容10ml容量瓶中，作

3、为储备液，备用。2.2含量测定吸取“2.1”项下的储备液10μl于具塞试管中，70℃水浴蒸干，精密加入0.2ml50g·L-1香草醛冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，振摇混匀后于65℃水浴加热20min，冰水冷却5min，加冰醋酸5ml摇匀，以相同试剂为空白对照，在波长554nm处测定吸光度，以标准曲线法计算总皂苷含量。3结果与讨论3.1标准曲线的绘制及线形范围精密称取人参皂苷Re对照品5.000mg，以甲醇溶解并定容于5ml容量瓶中，配制成1mg/ml的对照品溶液。分别精密吸取该溶液50，70，100，150，170，200，250μl，置10ml具

4、塞试管中，按“2.2”项下操作。以吸光度对浓度进行回归，方程为A=16.084C-0.013，相关系数r=0.9998。表明总皂苷在0.0083～0.0417mg/ml的浓度呈良好的线性关系。3.2酶法回流提取与直接回流提取的比较称取5g山茱萸粉末两份，加十倍量的95%乙醇，一份加1g左右的纤维素酶，调pH值5.0左右，在温度50℃回流2h，蒸干溶剂，按照“2.2”项下测定其A值，并计算结果，见图1。从图1可以看出在纤维素酶的作用下，提高了总皂苷的含量和产率，这是因为纤维素酶可以破坏植物的细胞壁而使有效成分提取率提高，使药材得到充分利用，纤维素酶应

5、用于中药有效成分的提取越来越显示出其有效性。3.3酶解时间的影响在酶解初始pH、酶量和酶解温度一定的条件下，考察不同酶解时间对山茱萸总皂苷提取含量的影响，结果见图2。从图2可以看出，在酶解初始pH值、酶解温度和酶量一定的条件下，总皂苷产量先随酶解时间的增加而增加，150min时达到最大值。这是因为随着时间的延长，酶活力得到充分的利用，酶解反应进行得较完全，随着酶解时间的增加总皂苷产量几乎不变。因此150min为最佳酶解时间。3.4酶量的影响在酶解初始pH、酶解时间和酶解温度一定的条件下，考察酶量对山茱萸总皂苷提取含量的影响，结果见图3。从图3可以看

6、出，在酶解液初始pH值、酶解时间和酶解温度一定的条件下，总皂苷产量先随酶量的增加而增大，在酶量为5U/g时，总皂苷产量达最大值，此后急剧下降而趋于平衡。这是因为在一定实验条件下，酶量低于最佳值时，酶解未进行完全，底物过量，致使总皂苷产量不高，达到最佳值时，酶解进行得较彻底，此时如果继续增加酶量，酶解进行程度不会增加反而下降，具体原因有待进一步研究。因此，综合各方面因素，确定在实验条件下酶解提取辣椒素的酶量最佳值为5U/g。3.5酶解温度的影响在酶解初始pH、酶量和酶解时间一定的条件下，考察酶解温度对山茱萸总皂苷提取含量的影响，结果见图4。从图4可以

7、看出，在其它条件固定的情况下，总皂苷产量先随酶解温度升高而增加，在40℃时为最大值，40℃后温度再升高，总皂苷含量减小。这是因为温度影响酶活性具有双重效应，温度升高时反应速度也加快，同时也加速酶变性失活。最适温度以下时前者占优势，最适温度以上时后者起主导作用，因此，酶解温度高于最适温度40℃，酶活性迅速丧失，总皂苷产量减少。3.6pH值变化的影响在酶量1、酶解温度和酶解时间一定的条件下，考察pH值对山茱萸总皂苷提取含量的影响，结果见图5。从图5可以看出，在其它条件一定的情况下，总皂苷产量先随酶解初始pH值的增大而增大，在pH=4.5时达到最大值，当

8、pH值达到4.5后再增加酶解初始pH值，总皂苷产量反而随pH值的增大而减小。这是因为pH值会影响底物分子的解离状态，也会影