纤维素酶用于山茱萸提取的初步研究

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1、纤维素酶用于山茱萸提取的初步研究王新胜，吴艳芳，黄年华【摘要】　　目的对酶法提取山茱萸总皂苷的酶解条件进行了初步研究，考察了酶解时间、酶用量、酶解温度和酶解初始pH值对总皂苷产量的影响。方法采用紫外可见分光光度法测定总皂苷含量，检测波长为554nm。结果确定了酶解的最优条件为:酶解时间为150min,酶量为5U/g，酶解温度为45℃，酶解初始pH=5.4。结论酶法能显著提高山茱萸总皂苷的提取率。【关键词】山茱萸纤维素酶提取　　Abstract：ObjectiveAneFructusCornieent.Theinfluenceofenzym

2、olysistime,enzymeamount,enzymolysistemperature,andpHoftheenzymesolutioninedbyUV-spectrophoto-metry.ResultsTheexperimentshoumprocess:enzymolysistimein，enzymeamountolysistemperatureesolutionFructusCornicanbeimprovedbycelluloseenzymetreatment.　　Keye；Extraction　　山茱萸为山茱萸科植物山茱萸

3、CornusofficinalisSieb.etZucc的干燥成熟果肉，具有补益肝肾、涩精固脱的功能〔1〕。化学成分分析表明，山茱萸果实中含有大量维生素、各种氨基酸、环烯醚萜苷类、皂苷、熊果酸、齐墩果酸等药用及营养保健成分〔2〕。近年研究发现山茱萸总皂苷具有较强的免疫抑制作用，是山茱萸作为免疫抑制的主要有效成分〔3〕。为了提高山茱萸总皂苷的利用率，充分发挥其功效，人们研究了许多山茱萸总皂苷的提取方法〔4～6〕。这些传统方法在一定的程度上提取了总皂苷，但效果不尽理想。目前，酶法已广泛应用于植物有效成分的提取中，并已显示出其优越性。本文把纤维

4、素酶用于山茱萸提取的研究，现报道如下。　　1材料与仪器　　纤维素酶，购于北京双旋微生物培养基制品厂；人参皂苷Re购于中国药品生物制品检定所；冰醋酸，莱阳市双双化工有限公司，高氯酸，天津市东方化工厂，香草醛、甲醇，天津市富宇精细化工公司，试剂均为分析纯；山茱萸药材，产地河南洛阳地区，经鉴定均来源于山茱萸科植物的成熟果实；上海精密仪器厂722型分光光度计。　　2方法　　2.1山茱萸中总皂苷提取工艺称取山茱萸原料5.000g，置于100ml圆底烧瓶中，酶解，反应一定时间后取出趁热过滤，收集滤夜，浓缩蒸干后，用甲醇溶解定容10ml容量瓶中，作为储

5、备液，备用。　　2.2含量测定吸取“2.1”项下的储备液10μl于具塞试管中，70℃水浴蒸干，精密加入0.2ml50g·L-1香草醛冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，振摇混匀后于65℃水浴加热20min，冰水冷却5min，加冰醋酸5ml摇匀，以相同试剂为空白对照，在波长554nm处测定吸光度，以标准曲线法计算总皂苷含量。　　3结果与讨论　　3.1标准曲线的绘制及线形范围精密称取人参皂苷Re对照品5.000mg，以甲醇溶解并定容于5ml容量瓶中，配制成1mg/ml的对照品溶液。分别精密吸取该溶液50，70，100，150，170，200，250

6、μl，置10ml具塞试管中，按“2.2”项下操作。以吸光度对浓度进行回归，方程为A=16.084C-0.013，相关系数r=0.9998。表明总皂苷在0.0083～0.0417mg/ml的浓度呈良好的线性关系。　　3.2酶法回流提取与直接回流提取的比较称取5g山茱萸粉末两份，加十倍量的95%乙醇，一份加1g左右的纤维素酶，调pH值5.0左右，在温度50℃回流2h，蒸干溶剂，按照“2.2”项下测定其A值，并计算结果，见图1。从图1可以看出在纤维素酶的作用下，提高了总皂苷的含量和产率，这是因为纤维素酶可以破坏植物的细胞壁而使有效成分提取率提高

7、，使药材得到充分利用，纤维素酶应用于中药有效成分的提取越来越显示出其有效性。　　3.3酶解时间的影响在酶解初始pH、酶量和酶解温度一定的条件下，考察不同酶解时间对山茱萸总皂苷提取含量的影响，结果见图2。　　从图2可以看出，在酶解初始pH值、酶解温度和酶量一定的条件下，总皂苷产量先随酶解时间的增加而增加，150min时达到最大值。这是因为随着时间的延长，酶活力得到充分的利用，酶解反应进行得较完全，随着酶解时间的增加总皂苷产量几乎不变。因此150min为最佳酶解时间。　　3.4酶量的影响在酶解初始pH、酶解时间和酶解温度一定的条件下，考察酶量

8、对山茱萸总皂苷提取含量的影响，结果见图3。　　从图3可以看出，在酶解液初始pH值、酶解时间和酶解温度一定的条件下，总皂苷产量先随酶量的增加而增大，在酶量为5U/g时，总皂苷产量达最大值，此后急