不同处理和保存条件下体外hcv rna稳定性研究

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1、不同处理和保存条件下体外HCVRNA稳定性研究作者：刘长利　任芙蓉　吕秋霜　刘景汉　庄辉【摘要】　　对献血者或病人进行HCV核酸检测时，如果标本的采集、处理、保存不当，会造成病毒核酸降解，从而影响检测结果的真实性。本研究的目的是对不同抗凝剂、不同温度、不同保存时间下的HCVRNA病毒稳定性进行研究，以考察常规采供血过程中，标本采集及保存方式对NAT检测的影响。采集7例HCVRNA阳性献血者的血样，采用不同的抗凝剂、经不同的温度和不同的时间保存后，采用荧光定量PCR方法测定HCVRNA病毒含量，考察HCVRNA的稳定性

2、。结果表明：①不同抗凝剂抗凝的全血于4℃保存48小时过程中,病毒含量下降至原滴度的42.7%；EDTA抗凝组各时间点的滴度均低于其它3组（分别相当于其它3组的67.6%-25.1%）。②ACD抗凝的全血在4、25和37℃保存48小时，病毒含量分别下降到原滴度的53.8%、72.5%、29.8%。③ACD抗凝的全血离心分离出血浆，4℃或25℃继续保存7天,病毒含量分别下降至原滴度的70.9%和25.1%。④ACD抗凝的全血分离的血浆，反复冻融4次，病毒含量下降到原滴度的38.9%。结论：①用于核酸检测的标本应该用无菌采

3、血管采样；②在无菌采血管采样的前提下，核酸检测标本用未抗凝血、EDTA、ACD、CPDA抗凝血均可；③采集的全血应避免放置37℃以上，ACD抗凝全血在4℃、25℃保存48小时内、37℃保存14小时内,HCVRNA病毒仍较为稳定；④分离后的血浆应避免放置25℃以上，ACD抗凝全血分离后的血浆在4℃保存7天，25℃保存3天，HCVRNA病毒仍比较稳定；⑤血浆标本应避免多次冻融，但冻融3次的血浆HCVRNA病毒含量仍然较为稳定；⑥无菌采样对维持病毒的稳定性非常重要；单纯的机械性溶血并不会明显导致病毒的降解；只要注意无菌的问

4、题和有合适的核酸提取方法去除血红素，HCVRNA病毒实际上比以前认为的要稳定得多。【关键词】丙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒RNA；病毒稳定性；保存条件；抗凝剂　　StabilityofHepatitisCVirusRNAinVariousProcessingandStorageConditions　　AbstractThestudyightinfluencethestabilityoftheHCVRNAina.Thesamplesobtainedfromsevenpatientsknoasamplesasamplesst

5、oredat4℃andat25℃(roomtemperature)after7daysdecreasedto70.9%and25.1%respectively.Afterfourfreeze-thaasamples.ItisconcludedthattheHCVRNAisstablerelatively.TheHCVRNAisresistanttodegradationunderroutinelaboratoryhandlingandstorageconditionsorbloodcollection,transpo

6、rtandprocessingconditions.TheinfluenceofdifferentanticoagulantsonthestabilityofHCVRNAisdifferent.BloodsamplesaseparatedportantforthestabilityofHCVRNAundergoingasepsisbloodcollectionprocess.HCVRNAremainsstableat4℃foratleast7daysoratroomtemperaturefor3days,allopl

7、escollectionandtransportintransfusionpracticenoasamplessubjecttouptothreeshort-termfreeze-thal，分别用ACD、CPDA、EDTA抗凝或不抗凝（未抗凝血）。采集后的血液立即移至百级净化台内进行无菌分装，将3种抗凝血分装于2ml无菌Ep管中，每管1.0ml，用于用不同抗凝剂采集血液、不同时间分离血浆（血清）及不同温度保存全血的研究。将分装完时作为0小时对照。同时将一部分ACD抗凝血置于50ml无菌离心管中（美国Corning公司

8、产品）,25℃放置6小时后1000×g离心10分钟分离血浆，然后分装于1.5ml无菌Ep管，每管0.5ml，用于不同温度保存的血浆及反复冻融血浆处理的研究。以上样品处理操作均为无菌操作。　　样本处理　　不同抗凝剂采集和保存的全血将未抗凝的血和CPDA、EDTA、ACD抗凝血置4℃冰箱中静止保存，于1、3、6、12、24、48小时各取2管（Ep管