生物技术复习资料

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1、一、1.植物细胞组织培养：在离体条件下利用人工培养基对植物器官、组织、细胞、原生质体等进行培养，使其长成完整的植株。2.细胞组织培养分为器官培养、茎尖分生组织培养、愈伤组织培养、细胞培养、原生质体培养。3.愈伤组织：在人工培养基上由外植体形成的一团无序生长的薄壁细胞。4.脱分化：在细胞组织培养中，一个成熟细胞或分化细胞转变成为分生状态的过程，即形成愈伤组织的过程。5.外植体：由活体植物体上提取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。6.再分化：植物的成熟细胞经历了脱分化之后，由愈伤组织再形成完整植株的过程。7.细胞全能性：一个

2、完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息。8.由脱分化的细胞再分化出完整植株的两种途径：（1）不定器官形成：在愈伤组织不同部位分别独立形成不定根和不定芽。（2）体细胞胚胎发生：在愈伤组织表面或内部形成类似于合子胚的结构，我们称其为体细胞胚，或不定胚，或胚状体。二、1.超净工作台过滤器可滤掉大于0.2μm的颗粒。2.酸度计用于测定培养基pH值，一般控制在5.5~6.0之间，用前需标定，pH过低培养基不凝。3.高压蒸汽灭菌时，一般在121℃时，控温15~40min。4.过滤灭菌器用于加热易分解、丧失活性的生化试剂的灭菌。5.

3、培养室温度一般要求在20~30℃之间，湿度保持在70%~80%。6.培养基的主要成分有：（1）水；（2）无机成分：①大量元素：在培养基中含量超过100mg/L的无机元素，包括N,P,K,Ca,Mg,S等；②微量元素：在培养基中含量低于100mg/L的元素，主要有铁、硼、锰、锌、铜、钼、钴、氯。（3）有机成分：①糖：既可作为碳源，为培养的外植体提供生长发育所需的碳骨架和能源，还具有维持培养基一定渗透压的作用，一般添加葡萄糖、蔗糖（1%~5%）、果糖、麦芽糖；②维生素：盐酸硫胺素（VB1）：全面促进植物全长，盐酸吡哆醇（VB6)：促进根的

4、生长，烟酸（VB3），生物素（VH），抗坏血酸（Vc）：抗氧化，防止褐变，叶酸；③肌醇：促进胚状体及芽的形成，用量一般在50~100mg/L；④④氨基酸及有机添加物：有机氮源，缓冲作用，调节培养物体内平衡；⑤琼脂：海藻中提取出来的一种高分子碳水化合物，使培养基在常温下固化形成固体培养基；⑥生长调节物质：生长素：促进细胞伸长生长和细胞分裂，诱导愈伤组织形成，促进生根，如吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）、2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）等，细胞分裂素：促进细胞分裂，抑制衰老，诱导芽分化，如激动素（KT）、6-苄基

5、腺嘌呤（BAP）、玉米素（ZT）、噻重氮苯基脲（TDZ），赤霉素（GA3）：植物生长，开花，结果，脱落酸(ABA)：促进组织成熟。7.培养基的制备：烧杯中少量水—大量元素—微量元素—铁盐—维生素—肌醇—氨基酸—植物激素—蔗糖—定容—调节pH—琼脂—灭菌。8.外植体基因活跃程度：草本好于木本，双子叶好于单子叶。9.外植体来源：大多数植物来说，茎尖是较好的外植体，也可以采用茎段和叶片等。10.影响植物组织培养褐变的因素：（1）植物种类及基因型：木本植物、单宁或色素含量高的植物容易发生褐变；（2）外植体部位及生理状态：幼龄材料一般比成龄材料

6、褐变轻，植物生长季节容易褐变；（3）外植体受伤害程度：尽可能减少伤口面积，伤口尽可能平整，接种时的化学消毒剂对外植体的伤害会引起褐变，消毒时间越长，褐变程度越严重；（4）培养基成分及培养条件：初代培养时，培养基中无机盐浓度过高可导致褐变，BAR或KT促进褐变，生长素类物质减轻褐变，低pH值抑制褐变，光照过强或高温加速褐变，高浓度CO2促进褐变；（5）培养时间过长：材料培养时间过长，会引起褐变，甚至导致死亡。1.外植体褐变的防止：（1）选择适当的外植体；（2）对外植体进行预处理：经流水冲洗后，放置在5℃左右的冰箱内低温处理12~14h，

7、消毒后先接种在只含蔗糖的琼脂培养基中培养3~7d，使组织中的酚类物质先部分渗入培养基中，取出外植体用0.1%漂白粉溶液浸泡10min，再接种到合适的培养基上；（3）选择适宜的培养基和培养条件；（4）添加褐变抑制剂和吸附剂：褐变抑制剂主要包括抗氧化剂和PPO的抑制剂，PVP、柠檬酸、Vc、活性碳；（5）连续转移。2.一般来说黑暗条件下，利于细胞、愈伤组织的增殖，而器官的分化往往需要一定的光照。3.低氧利于体细胞胚发生，高氧利于生根。4.继代培养：组织培养中，培养物培养一段时间后，为了防止培养的细胞团老化，或培养基养分利用完而造成营养不良

8、及代谢物过多积累毒害等的影响，要及时将其接种到新鲜培养基中，进行继代培养，以使培养物能够顺利地增殖、生长及分化，长成完整的植株。5.固体培养一般4周继代一次，液体培养一般1-2周继代一次。6.玻璃化：试管苗生长异常，叶、