海南裂叶山龙眼叶超临界提取物化学成分的气相色谱质谱联用分析(ⅱ)

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1、海南裂叶山龙眼叶超临界提取物化学成分的气相色谱质谱联用分析(Ⅱ)靳德军符乃光梁振益刘明生【摘要】　　目的对海南裂叶山龙眼叶超临界20MPa压力提取物进行分析，为进一步开发利用该资源提供依据。方法采用CO2超临界流体萃取海南裂叶山龙眼叶的脂溶性部位，气相色谱-质谱联用（GC-MS）法鉴定化学成分，归一化法测定各成分相对含量。结果从海南裂叶山龙眼叶超临界二氧化碳20MPa压力提取物中共分离出11个组分，全部进行了鉴定，其中含量高于20%的有3个，为邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯（21.51%）；二十九碳烷（25.73%）；3,5-

2、二烯豆甾烷（25.73%）。结论海南裂叶山龙眼叶的超临界二氧化碳20MPa压力提取物中含有酯类、烃类、甾类等化学成分，为海南裂叶山龙眼的进一步研究奠定了物质基础。【关键词】海南裂叶山龙眼；叶；二氧化碳超临界流体萃取；气相色谱质谱　　Abstract：ObjectiveToanalyzetheconstituentsextractedfromtheleavesofHeliciopsislobatabysupercriticalfluidCO2(SFE-CO2)at20MPa.MethodsTheconstituentsethod

3、,thenseparatedandidentifiedbyGC-MS.Relativecontentofeachponentinedbyareanormalization.Results11separatedconstituentsainconstituentsinextractsastan-3,5-dien(25.73%).ConclusionThereareester,hydrocarbonandsteroidintheconstituentsextractedfromtheleavesofHeliciopsislobata

4、.ThestudyestablishedagoodmethodforfurtherstudyanddevelopmentofHeliciopsislobata.　　Key;Leave;SupercriticalfluidCO2;GC-MS　　海南裂叶山龙眼Heliciopsislobata(Merr.)Sleum，又名调羹树、那托和定朗，是山龙眼科（Proteaceae）假山龙眼属（Heliciopsis）植物，广泛分布于海南中南部山区。海南裂叶山龙眼的根皮与叶入药，药性味淡、涩，性凉，小毒，有清热解毒之功效，民间主要用于治疗腮

5、腺炎与皮炎等〔1〕，海南中部山区群众则长期用来治疗肿瘤。本课题组已对海南裂叶山龙眼叶化学成分及其超临界萃取物的抗肿瘤活性进行了系列研究〔2～4〕。为了进一步明确其抗肿瘤活性及其物质基础，本文采用CO2超临界流体20MPa压力萃取出其叶部的脂溶性部位，用人肝癌细胞株(HepG2)、人乳腺癌细胞株（MCF7）以及人宫颈癌细胞株（Hela）体外筛选抗肿瘤活性，平均半数抑制浓度IC50值分别为65.63μg/ml，22.10μg/ml和37.87μg/ml，显示了比7.2MPa萃取物较强的细胞毒活性，并用GC-MS联用技术对其挥发性成分

6、进行分离鉴定，为进一步研究提供科学依据。　　1器材　　HL-2L/50MPa-ⅡAQ型超临界CO2流体萃取仪（杭州华黎泵业有限公司），HP6890/HP5973MS联用仪（美国安捷伦公司），乙醚为分析纯，天津化学试剂一厂产品。海南裂叶山龙眼叶于2006-09采于海南省乐东县尖峰岭，经中国医学科学院药用植物研究所海南分所陈伟平研究员鉴定为海南裂叶山龙眼Heliciopsislobata(Merr.)Sleum叶片。　　2方法与结果　　2.1提取物的制备采集海南裂叶山龙眼叶片，自然阴干粉碎，过20目筛，称取500g置入萃取釜中萃取，

7、采用的CO2超临界流体萃取条件为：萃取釜压力20MPa，萃取温度35℃，分离釜压力5MPa，分离釜温度30℃，CO2流量28kg/h,夹带剂为无水乙醇，流量2ml/min，萃取时间120min，从分离釜收集萃取物，回收乙醇后得12g,收率2.4%。吸取萃取物100μl,乙醚溶解完全，微孔滤膜过滤，备用。　　2.2提取物的GC-MS联用分析　　2.2.1GC-MS条件HP-5MS（30m×0.25mm×0.25μm）弹性毛细管柱，采用程序升温，即80℃（3min，4℃/min）→150℃（6℃/min）→250℃（4min）；气化

8、室温度250℃；柱前压为63kPa；载气为高纯氦气（99.999%），流量为1.0ml/min；进样量为0.4μl；分流比为80∶1。离子源为电子轰击源（EI）；离子源温度230℃；四极杆温度150℃；电子能量70eV；电子倍增器电压1382V；接口温度270℃