放线菌spri70014杀草成分的研究

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1、放线菌SPRI70014杀草成分的研究顾学斌徐文平叶高艺张育雷倪玮玮陶黎明【摘要】一株来源于江西土壤代号为SPRI70014的放线菌发酵产物具有很强的杀草活性，本文采用溶剂萃取、硅胶柱层析及制备HPLC等手段对该菌株发酵产物的活性组分进行了活性跟踪分离，得到纯度大于98%化合物纯品，通过理化性质及波谱学分析，鉴定其结构为2〔2(3，5二甲基2氧环己基)6氧四氢吡喃4基〕乙酰胺。并用除草剂生测标准化操作法(SOP)初步评价了该化合物除草活性。【关键词】放线菌；次级代谢物；乙酰胺；杀草活性ABSTRACTToexploretheherbicidalactivep

2、onentinfermentationofasoilactinomyceteSPRI70014,apoundnchromatographyandpreparativeHPLC.Theseparationprocedureeansofphysicochemicalpropertiesandspectralanalyses,thestructureofthepoundinedas:2〔2(3,5Dimethyl2oxocyclohexyl)6oxotetrahydropyran4yl〕acetamide.Theherbicidalactivityofthepo

3、undethod.KEYNR等波谱分析，鉴定出活性组分的结构。本文着重报道SPRI70014的放线菌所产活性组分的分离提取、结构鉴定及活性研究。1材料与方法1.1试验试剂和仪器AGLOBALGAA076LC型质谱仪；LCAT高效液相色谱仪；SephadexLH20和层析用硅胶(G)分别为Pharmacia公司和青岛海洋化工厂产品。活性测试采用国家创制中心室内盆栽试验SOP所制定的生测方法〔2〕。1.2菌株的分离与培养(1)产生菌株放线菌SPRI70014从江西新赣地区的土壤中分离得到。(2)培养从28℃培养4d高氏1号培养基上取适量菌体，接种于种子培养基(葡萄糖4.0%，黄豆

4、饼粉3.0%，酵母粉0.5%，硫酸胺0.1%，氯化钠0.1%，磷酸氢二钠0.005%，自来水配制，pH值调至7.2)，于28℃，220r/min的条件下摇床培养2d得到种子培养液。将该种子培养液按10%的接种量接种于400瓶每瓶含50ml液体培养基(成分同上)的250ml三角瓶中，28℃，220r/min摇床培养4d，得发酵液20L。1.3活性测试(1)生物活性测试用上海市农药研究所制定的生测方法〔2〕进行活性跟踪。(2)活性组分的确定发酵液经过离心分离后，菌丝体用80%丙酮浸泡。酮浸泡液减压浓缩蒸干，得到浸膏，少量甲醇溶解并加水恢复到发酵液原体积；与离心得到的上清液一起，分别稀释2

5、0倍，进行活性测定。上清液显示了很强的杀草活性。结果表明活性组分主要集中在上清液中。取30ml上清液，分成三份，分别加入等体积的乙酸乙酯和正丁醇萃取并测试活性。结果表明，只有正丁醇具有与上清液相应的生物活性，故确定活性部位。1.4提取分离发酵液高速离心，分为上清液和菌丝体两部分。菌丝体用80%的丙酮液浸泡过夜，滤液经减压蒸馏除去丙酮后，合并上清液共16L，用稀盐酸调节溶液pH值约为5～6，有沉淀析出，静置过夜，过滤得上清液。减压蒸馏浓缩至约5L，等体积的正丁醇萃取三次，提取液浓缩至浸膏状3.8g。先采用层析法〔3〕，浸膏拌硅胶过柱，以甲醇氯仿梯度洗脱，收集各馏分，减压浓缩，合并、得

6、到五个色谱部分，每个部分经活性测试，确定其中一个为主要活性部分(A)，再经硅胶板层析、SephadexLH20柱色谱和高效制备液相色谱等分离手段，从A中得到化合物三个：A1(15mg)、A2(23mg)和A3(8mg)。经活性测试，确定A2为主要活性组分。2结果与讨论2.1化合物结构鉴定化合物A2白色粉末MS(EI，)，m/z(%)：219，246，264，282(M+)。1HNMR(CDCl3)：δ0.96(d，3H)，1.28(d，3H)，1.42～1.47(m，2H)，1.53～1.62(m，1H)，1.71～1.78(m，1H)，1.89～1.95(m，1H)，

7、2.04～2.10(m，1H)，2.14～2.21(m，1H)，2.32～2.40(m，3H)，2.54～2.59(m，1H)，2.62～2.71(m，2H)，2.74～2.78(m，1H)，4.01～4.06(m，1H)。13CNMR(CDCl3)，δ14.78(C13)，18.59(C12)，28.39(C8)，28.97(C3)，36.44(C7)，37.89(C4)，39.39(C2)，41.14(C14)，41.68(C10)，44.12(C9