雪灵芝提取物总黄酮测定及对小鼠的镇痛作用

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1、雪灵芝提取物总黄酮测定及对小鼠的镇痛作用作者：龚受基,姜翠霞,李腾飞,周以智,段小群，徐庆【摘要】　　目的用分光光度法对雪灵芝提取物总黄酮含量进行了测定,探讨雪灵芝有效部位对小鼠疼痛的镇痛作用。方法采用Na(NO2)2-AlCl3法测定雪灵芝有效部位总黄酮含量；用热板法、醋酸致痛法观察药物对致痛小鼠反应的影响。结果C012部位总黄酮含量为59.16%，C013部位总黄酮含量为56.86%；C012和C013两部位对热板法致痛具有较好的镇痛作用，C012部位200mg/kg剂量镇痛效果显著，其0.5h和2.0hP<

2、0.001，4.0hP<0.01，1.0hP<0.05；100mg/kg在0.5h有很好的镇痛效果（P<0.01）；C013部位200mg/kg在2.0,4.0h镇痛效果好（P分别为0.001和0.01），在0.5hP<0.05；剂量100mg/kg在4.0h具有较好的镇痛效果（P<0.05）。C012部位对醋酸致痛在100mg/kg剂量时具有很好的镇痛效果（P<0.01），50mg/kg具有较好的镇痛作用（P<0.05）。结论雪灵芝C012和C013两部位总黄酮含量较高，具有

3、显著的镇痛作用，其作用机制有外周和中枢参与。【关键词】雪灵芝；镇痛；机制雪灵芝系石竹科蚤缀属植物(Arenaria.spp)，多年生垫状草本，分布于青藏高原海拔约5000m左右的永久雪线附近地带。《藏药志》记述雪灵芝性味功用“苦寒，清肺中之热，止咳，降血压，滋补；治肺炎、淋病、淋巴结核、子宫病”。彭宝珠等［1～3］对雪灵芝的药理药效学进行了研究。试验证明，雪灵芝提取物有抗炎、抗免疫、解热镇痛、镇咳祛痰、抗乌头碱引起的心律失常作用、抗缺氧和降血压作用,对酒精性肝损伤具有明显的保护作用，并能够增强免疫功能，对肿瘤具有抑制作

4、用。雪灵芝是一种能提高综合免疫能力的传统药物，其药用价值有进一步研究的必要。研究表明［4］，蚤缀中含有氨基酸、糖类、生物碱、黄酮苷、皂苷及香豆素等多种成分。本研究对雪灵芝的提取物进行了分离，得到了镇痛有效部位，利用分光光度法对两个部位进行了总黄酮含量的测定,并其镇痛作用进行了研究。　　1材料　　1.1药物与试剂阿司匹林，罗痛定注射液(广东省博罗先锋药业集团有限公司,批号:070904)，罗痛定片(成都市湔江制药厂,070603)；芦丁对照品（南京替斯艾么中药技术研究所，批号：TCM027-080118）；亚硝酸钠、氯化

5、铝、乙醇、冰醋酸、氢氧化钠均为普通市售分析纯试剂；雪灵芝采自西藏自治区。　　1.2动物昆明种小鼠，雌雄不论，体质量18～22g，洁净级，由广西医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：2005A033号。　　2方法　　2.1分光光度法测定总黄酮含量［5］雪灵芝药材采自西藏自治区，经广西植物研究所高级工程师黄定中鉴定为雪灵芝ArenariakansuensisMaxim。雪灵芝全草用水提取，水提液上D101大孔树脂，以蒸馏水洗脱至无色；以30%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，得C012；60%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥

6、，得C013。精确称取20.0mg芦丁对照品，以60%乙醇溶液超声溶解并定容至100ml，分别移取上述芦丁储备液0，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00ml于7个25ml量瓶中，加入0.50mol/L的亚硝酸钠溶液1.0ml，摇匀静置5min后，加入0.30mol/L氯化铝溶液1.00ml，摇匀静置5min后，加入1.00mol/L氢氧化钠溶液5.0ml，用60%乙醇水溶液定容至刻度。取芦丁溶液在波长360～600nm区间扫描，确定最大吸收波长为505nm。取不同浓度芦丁溶液于波长505nm处比

7、色测定吸光值，试剂空白参比，绘制标准曲线，线性回归分析得标准回归方程：A=2.3535C-0.03712，回归系数r=0.9933。分别精密称取样品C012：0.3005g，样品C013：0.3009g，用60%乙醇溶解并定容到50ml的容量瓶中，再各取两样品溶液2ml于50ml的容量瓶中，定容。参照上述方法，吸取标准品溶液或样品溶液，进行精密度、稳定性、重现性和回收率实验［6］。　　2.2镇痛实验方法［7］　　2.2.1热板法　　雌性小鼠，放在(55±0.5)℃的金属热板上，挑选痛阈值在5～30s的小鼠，根据痛阈值随

8、机分生理盐水组、阳性药物组和测试药物高、中、低剂量组，每组10只，各组均ig给药（0.2ml/10g），1次/d，连续7d。末次给药后不同时间分别再测痛阈,以药后痛阈的提高值为指标，进行组间比较。　　2.2.2对醋酸引起的小鼠扭体镇痛实验取昆明种小鼠80只，随机分成8组，即生理盐水组，阿司匹林组（200mg/kg），C012高、中