实验1__玻璃器皿的包扎及灭菌

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1、2009CentralLaboratoryofBiology实验一玻璃器皿的包扎及灭菌微生物学实验课前预习与目的要求【课前预习】1.高压蒸汽灭菌原理。2.上海申安LDZX-50KBS灭菌锅的使用方法。【目的要求】1.学习并掌握玻璃器皿的包扎方法。2.掌握高压蒸汽灭菌的基本原理及操作方法。基本原理微生物学实验所用的器皿，大多数要进行消毒、灭菌，才能用来培养微生物。玻璃器皿的包装方法正确合理，在使用过程中才能有效防止杂菌的污染。玻璃器皿包装好后，一般用高压蒸气灭菌法进行灭菌。基本原理高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾

2、而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。实验用品棉花，试管，培养皿，纱布，三角瓶，橡皮筋，量筒，牛皮纸（或旧报纸），LDZX-50KBS立式高压蒸气灭菌锅等。方法步骤1.熟悉微生物学实验的结构与功能。2.清洗试管、三角瓶，培养皿等玻璃器具，烘干。3.制作试管棉塞及三角瓶棉塞（参照微生物学实验基本操作技术）。4.用量筒或吸管取适量自来水于三角瓶和试管中，包装好以制备无菌水。5.包装空培养皿，移液管。6.灭菌

3、（参照Ⅰ）。玻璃器皿清洗方法玻璃器皿在使用过程中确保干净，用过的器皿应及时清洗。器皿一般可以用去污粉、肥皂或洗洁净清洗。琼脂培养基的器皿应先将培养基刮去。琼脂和固体物不能丢弃到水池中，以免堵塞管道。清洗方法详见Ⅰ。棉塞的制作棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染，二是保证通气良好。形状，大小，松紧适度。培养皿的包装培养皿常用旧报纸紧紧包裹，一包7～10套，包好后干热或湿热灭菌。也可用金属筒包装。移液管的包装作用：以免使用时将杂菌吹入其中，或不慎将微生物吸出管外。试管和三角瓶的包装试管口和三角瓶瓶口塞棉花塞或硅胶塞；用二层报纸包扎好（如有牛皮纸，效果更好），进行干热或湿热灭

4、菌。试管较多时，一般7个或10个一组，再用双层报纸包扎。上海申安LDZX-50KBS灭菌锅的使用1）打开电源与开关，检查水位显示灯；2）加灭菌物品；3）盖紧；4）设定温度和时间；5）查看排气（水）阀旋至排气处；6）排气；7）结束后取物。实验结果记录自己制作的实验用品（含无菌水）名称的规格与数量。注意事项1.实验前，熟悉实验室平面布局图，了解实验仪器用品摆放规律及用途。2.制备无菌水时，试管装水量要超过试管高度的1/5，三角瓶装水量不要超过规格容量的1/2（装量过多，灭菌过程中易喷出或润湿棉塞）；3.灭菌锅的操作安全。实验报告1.高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内冷

5、空气排尽灭菌完毕后，为什么待压力降低“0”时才能打开排气阀，开盖取物。2.在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，怎样杜绝一切不安全的因素。3.灭菌在微生物实验操作中有何重要意义。CentrallaboratoryofBiology生物学实验教学中心Thanksforyourattention!