肾阴虚型糖尿病动物模型的研制

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1、肾阴虚型糖尿病动物模型的研制　　摘要:　本实验是“中医药现代化研究”课题的前期动物造模实验之一。通过链脲佐菌素、甲状腺素两种药物对mol/L，符合糖尿病模型标准，成功地制作了肾阴虚型糖尿病动物模型。　　　　采用链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射，引起动物糖尿病症状；然后用甲状腺素(T4)行皮下注射，加重动物肾阴虚表现。或用T4皮下注射先引起动物肾阴虚，再加用STZ注射，诱发动物糖尿病。或单用STZ注射诱发糖尿病。这三种给药方式，均使造模动物表现出肾阴虚型糖尿病的证候。现将动物模型的制作方法、生化指标测试结果报告如下。　　1　材料与方法　　1.1　动物与试剂　　1.1.1　动物

2、　　a公司产品，批号：HO250。临用前用pH4.2枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液溶解，配成2%的溶液，按65?mg/kgbg/kgbmol/L时，连续‘两天皮下注射胰岛素8个单位［6］。　　1.2　实验方法　　1.2.1　观察项目　　体重、食量、饮水量、尿量、体温、神态体毛、活动度、大便等。　　1.2.2　尿糖及尿常规检测　　动物用代谢笼收集尿液作尿糖定性、尿蛋白、酮体、潜血等常规检查。　　1.2.3　血生化指标测定　　造模在给药后的第3天开始，每隔3天剪大鼠鼠尾取血测空腹8小时后的血糖值，仪器为美国Lifescan公司生产的OneTouch血糖仪。并在给药后的第14天取血测肝、肾

3、功能。　　2　结果　　2.1　肾阴虚表现　　模型组大白鼠随着给药日数的增加而日益消瘦，生长发育远不如正常对照组。三组造模组体温较正常组平均升高1.2°C，体毛无光泽，活动频度增加但反应迟钝，大便干结、色黑，饮水量、食量、尿量均高于正常组2～3倍。　　2.2　体重变化　　正常组大鼠开始平均体重210g，饲养20天后平均体重增加30?g。三组造模组大鼠随时间的延长，平均体重下降32.5g，与正常组比较，体重变化存在统计学差异，三组之间的体重变化无统计学差异。　　2.3　动物死亡情况　　B组大鼠在STZ腹腔注射的第5～7天有3只死亡；C组大鼠在STZ注射后的第6天有2只死亡，加用T

4、4注射后的第3天有3只死亡；D组大鼠在加用STZ注射后的第2天有1只死亡。共有9只死亡，死亡率为26%。　　死亡大鼠均行心脏采血，检查血糖、肝功能和肾功能，结果均高于正常值，说明大鼠死于高血糖诱发的肝、肾功能衰竭。　　2.4　血糖变化　　三组造模大鼠均在STZ腹腔注射后的第3天开始，每间隔3～4天，监测空腹8小时后血糖，结果显示三组大鼠血糖均高于正常组(P＜0.01)。三组之间血糖值比较无统计学差异。(见附表)附表　各组大鼠血糖变化状况(mmol/L，x±SD)　A组B组C组D组造模前3.0±0.212.8±0.182.76±1.012.90±0.62造模后3.05±0.20

5、12.2±2.2814.5±2.5214.6±2.60　　2.5　尿糖及尿常规检查变化　　四组大鼠均用代谢笼收集24小时尿，测尿糖及尿常规。造模大鼠在注射STZ后24小时开始监测尿糖及常规检查。结果三组造模大鼠均表现为尿糖定性强阳性，无论血糖波动情况如何，尿糖始终表现为强阳性。50%的大鼠尿蛋白定性为弱阳性。3　讨论　　用甲状腺素造肾阴虚模型早在七十年代就有报道［7］。随着中医药理论研究的深入，迫切需要研制出能反映人类疾病症状，且能体现中医证型的病证结合的动物模型。　　笔者用三种方式给大白鼠注射STZ和T415天，发现三组造模大鼠均有消瘦、生长发育缓慢，体温升高、毛无光泽，活

6、动频度增加、反应迟钝，多饮、多食、多尿，大便干结等肾阴虚证表现；同时，造模大白鼠的血糖值均在10.0～17.0mmol/L之间，尿糖定性强阳性，符合糖尿病动物模型的标准。可以认为，三种造模方式均可造模肾阴虚型糖尿病的病证结合模型。　　链脲佐菌素是从无色链霉菌属中分离出来的一个广谱抗菌素，为无色固体，易溶于水。STZ能选择性损伤胰腺β-细胞，而后引起这些细胞坏死。实验动物在用药后表现出人类典型的糖尿病症状，如高血糖、尿糖，多饮、多食、多尿，体重下降，酮尿及酸中毒，还可引起部分动物肾功能损害而出现蛋白尿［8］。　　糖尿病的症状符合中医的消渴证特点，即多饮、多食、多尿和体重下降。中

7、医根据“三多”症状，将消渴证分为上、中、下三消。病变脏腑在肺、胃、肾，而以肾为关键。肺主治节，为水之上源，如肺燥阴虚，津液失于敷布，则胃失濡润，肾失滋养；胃热偏盛，则可灼伤肺津，耗损肾阴。而肾阴不足，阴虚火旺，亦可上炎肺、胃，终至肺燥、胃热、肾阴虚同时存在［9］。本实验最后观察的造模大白鼠，尿频量多、混浊如脂膏，正处于肾阴亏虚阶段。　　根据上述原理，可以认为：STZ诱发的大白鼠糖尿病模型，同时也是肾阴虚型糖尿病模型。如再加用甲状腺素，以加重肾阴虚表现，适当缩短造模天数，则更为理想。本模型符合中医理论，是