铜绿假单胞菌mexaboprm主动外排表型筛选和外排基因检测

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1、铜绿假单胞菌MexABOprM主动外排表型筛选和外排基因检测作者：曹敬荣沈定霞钱妙玲罗燕萍徐雅萍田芳【摘要】目的研究解放军总医院临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌的主动外排系统，为指导临床合理选择抗生素提供依据。方法采用外排泵抑制剂(苯丙氨酸精氨酸β萘酰胺)与喹诺酮类抗生素，以微量肉汤稀释法测定加与不加外排泵抑制剂时环丙沙星与左氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)值，并计算MIC值的变化，根据加与不加外排泵抑制剂MIC值降低3个稀释度及以上筛选主动外排表型阳性菌株；PCR扩增外排表型阳性菌的耐药基因oprM、mexB和mexR，并对3株菌进行mexR

2、基因测序分析；RTPCR检测oprM基因的mRNA水平，分析耐药基因的表达情况。结果苯丙氨酸精氨酸β萘酰胺能极大的降低左氧氟沙星和环丙沙星的MIC值，70株多重耐药铜绿假单胞菌中46株表型阳性(65.7%)，其中PCR检测oprM、mexB和mexR基因同时阳性菌株42株(91.3%)，仅oprM基因阳性2株(4.3%)，oprM、mexB和mexR基因均阴性2株(4.3%)。RTPCR产物测定A值(A260/A280)与PAO1对照阳性菌株13株，以PAO1的oprM/rpoD的A值为对照阳性菌株4株，同时满足A值(A260/A280)和

3、oprM/rpoD比值均高于PAO1的菌株3株。测序结果与GenBank中已知的mexR基因比对，其中2株同源性为100%，1株第434位核苷酸插入2bp(AT)。结论中国人民解放军总医院多重耐药铜绿假单胞菌大多存在主动外排的耐药机制，其耐药与外排泵过度表达相关。【关键词】铜绿假单胞菌主动外排外排泵抑制剂苯丙氨酸精氨酸β萘酰胺MexABOprMRTPCRDetectionofthephenotypeandgenesofactiveeffluxpumpABSTRACTObjectiveTostudytheactiveeffluxpumpsof

4、clinicalisolatesofmultidrugresistantPseudomonasaeruginosainPLAhospitalandofferthetheoreticalevidencestoclinicians.MethodsThemicrodilutionmethodof96inetheminimuminhibitoryconcentrations(MICs)oflevofloxacin,ciprofloxacinaloneandtheeffectofthepresenceofeffluxpumpinhibitor(PheArg

5、βnaphthylamide).BasedonthevarietyofMICtodecrease8foldinthepresenceofPAβNtochoosethepositivephenotypestrains.PCRps:oprM,mexBandmexRbasedonthephenotypicselection.DNAsequencingexRgenesfor3strains.RTPCRRNAandanalyzetheexpressionoftheresistancegenes.ResultsFortysixstrains70mul

6、tidrugresistantP.aeruginosa(65.7%),andtheyplatestoamplifyoprM,mexBandmexRgenes.Amongthem,42strainsexBandmexRsimultaneously(91.3%).Tplificationbyallprimerpairs(4.3%).TheresultsofA(A260/A280)andoprM/rpoDforRTPCRproductsshoultaneouslybasedonPAO1andDNAsequenceresultsshoologyand1s

7、trainhasa2bp(AT)insertionin434point(GenBankaccessionnumberU23763).ConclusionsMostmultidrugresistantstrainsofP.aeruginosahaveactiveeffluxpumpsinPLAhospital.TheresistantmechanismofP.aeruginosaisassociatedexRgene.KEYexABOprM;RTPCR铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa，PA)是医院常见条件致病菌之一，临床分

8、离株多重耐药(Multidrugresistance，MDR)直接影响感染的治疗，因而研究耐药机制指导合理用药是大家关注