骨肉瘤中survivin与caspase3的表达及其相关性研究

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1、骨肉瘤中Survivin与Caspase3的表达及其相关性研究作者：王玉峰，王岩峰，邴佩旭，祝勇【摘要】［目的］探讨Survivin、Caspase3在骨肉瘤中的表达及其与细胞凋亡的关系。［方法］采用免疫组化法检测骨肉瘤及正常骨组织中Survivin和Caspase3的表达，运用TUNEL方法检测细胞的凋亡。［结果］在77％的骨肉瘤组织中Survivin阳性表达，显著高于正常组织；Caspase3蛋白在骨肉瘤和正常组织中的阳性表达率分别为65％和89％，差异有显著性；在骨肉瘤中，Survivin和Caspase3的表达呈负相关；Survivin呈阳性的骨肉瘤中细

2、胞凋亡指数明显低于Survivin呈阴性组（P＜0.01）；Caspase3呈阳性的骨肉瘤中细胞凋亡指数明显高于Caspase3呈阴性组（P＜0.01）。［结论］Survivin、Caspase3参与了骨肉瘤的发展，Survivin可能通过抑制Caspase3的活性从而发挥其抑制骨肉瘤细胞凋亡作用。【关键词】骨肉瘤；Survivin;Caspase3;凋亡Abstract：［Objective］Toinvestigatetherelationshipbetmunohistoehemistry.Theapoptosisofosteosaracellinaldeox

3、ynucleotidetransferasemediateddUTPnickendlabeling（TUNEL）.［Result］Theresultsshoaltissues.Caspase3albonetissues,portantroleintheprogressofosteosara.Survivinexertprobablytheactofrestrainingosteosaracellapoptosisbythepathin，分别滴加Survivin和Caspase3抗体，37℃温箱孵育60min，PBS冲洗，滴加生物素标记的二抗，37℃孵育30min，PB

4、S冲洗，加入辣根标记链霉卵白素工作液，37℃孵育30min，DAB显色，苏木素复染，二甲苯透明，封片。以PBS置一抗作为阴性对照，以已知阳性切片作为阳性对照。1.3TUNEL法对细胞凋亡的检测除去Survivin和Caspase3蛋白同时为阴性的骨肉瘤样本，连续切片，细胞或组织片固定，梯度乙醇处理，PBS浸泡，蛋白酶K处理标本，双蒸水洗涤，3％H2O2甲醇液消除内源性HRP，PBS中洗涤，1XTdT标记缓冲液孵育，TdT标记BiotindNTP，终止标记反应，PBS洗涤，DAB显色，去离子水洗涤，进行细胞凋亡的检测。1.4统计学方法结果应用Imagetoolversi

5、on1.0软件分析，应用t检验、x2检验及等级资料相关检验（Spearman检验），P＜0.05时有统计学意义。2结果2.1判定标准免疫组化Survivin和Caspase3的阳性反应产物呈棕黄色颗粒，主要定位于细胞浆（图1、2），依据Caspase3阳性表达的着色深浅和阳性细胞数将表达强度分为4级：（-）无阳性反应或阳性细胞数＜25％；（+）阳性细胞≥25％～50%；（++）49％～75％的细胞显阳性；（+++）阳性细胞数＞75％。凋亡阳性细胞（TUNEL法）的细胞浆呈棕黑色（图3），凋亡指数AI（apoptosisiindex，AI）为凋亡细胞与所有肿瘤细胞的比值

6、。40例骨肉瘤组织中，Survivin呈阳性检出的有31例，占77％；40例正常骨组织中Survivin阳性检出者5例，占13％，显著低于瘤组织（P＜0.05）。低分化肉瘤Survivin的表达率高于高／中分化肉瘤（P＜0.05）；在不同临床分期之间有显著性差异（P＜0.05），病理分级越高，Survivin的表达率越高。Caspase3在骨肉瘤和正常组织中的阳性表达率分别为65％（26／40）和89%（34／38），二者之间有显著性差异（P＜0.05）。高、中分化的骨肉瘤组织中Caspase3蛋白的阳性表达率明显低于低分化的骨肉瘤组，两者之间有显著性差异（P＜0.0

7、5）。2.3Survivin与Caspase3表达的关系在骨肉瘤组织，随着SurvivinmRNA表达的升高，Caspase3的表达随之降低，经Spearman相关检验，表明二者的表达呈负相关（r=-0.48，P=0.016）。2.4凋亡细胞的检测及AI值测定结果TUNEL法所标记的细胞胞浆呈棕黑色，Survivin阳性的骨肉瘤组织组AI值为0.71％，显著低于Survivin阴性组（1.32％）（P＜0.05）；Caspase3蛋白阳性的骨肉瘤组织组AI值为1.29％，明显高于Caspase3蛋白阴性组（0.57％）