补肾益气中药对小鼠围着床期子宫内膜形态结构及pr表达的影响

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1、补肾益气中药对小鼠围着床期子宫内膜形态结构及PR表达的影响作者：刘艳娟黄光英杨明炜陆付耳【摘要】　　［目的］探讨补肾益气中药改善胚泡着床障碍小鼠着床期子宫内膜微环境的机制。［方法］于妊娠第4天9AM利用米非司酮建立胚泡着床障碍小鼠模型，予补肾益气中药进行干预，于妊娠第4天9PM处死小鼠，观察子宫内膜形态学变化，采用免疫组化技术及ethods］MicemodelofEIDinducedbymifepristoneat9AMonday4ofpregnancy(Pd4)etriumicroscope.TheendometrialPRexpressionsmunnohistochem

2、icalSPmethodandetrialmorphologyshoetrialdevelopmentretardationinmodelgroup，etrialdevelopmentintreatmentgroupprovedandnearlysimilartocontrolgroup.LevelsofPRintheBSRtreatedgroupodelgrouprespectively,andshothoseinthenormalcontrolgroup.［Conclusion］BSRcouldimprovetheembryoimplantationbyentofendo

3、metriumandthelevelsofPRexpressioninmiceetrialimplantationmicroenvironment;progesteronereceptor　　不孕症的发生率约占育龄妇女的15%，尽管人工助孕技术（IVFET）治疗不孕症已获得较大的成功，但其妊娠率仍较低。胚泡着床障碍是导致IVFET临床妊娠率低的主要原因之一，子宫内膜着床微环境是影响胚泡着床的主要原因之一［1］。因此，改善子宫内膜着床微环境，提高着床率是提高人工助孕技术孕育成功率的关键。补肾益气中药由桑寄生、黄芪、丹参等药组成，具有补肝肾、益气血之功效。前期研究已观察到，在

4、妊娠早期，补肾益气中药能提高胚泡着床障碍小鼠的胚泡着床率［2］。其配合IVFET治疗不孕症，可提高胚泡移植的成功率［3］。为探讨补肾益气中药促进胚泡着床的作用机制，本实验拟通过观察补肾益气中药对胚泡着床障碍小鼠围着床期，子宫内膜形态结构、子宫孕激素受体（progesteronereceptor，PR）的表达，进一步阐述补肾益气中药对围着床期子宫内膜着床微环境的影响。　　1材料与方法　　1.1实验动物　　清洁级性成熟期、雌性未孕昆明小鼠，体重30～35g，雄性小鼠40g左右，由湖北省卫生防疫站实验动物中心提供，合格证号：医动字第19-082号。　　1.2实验药物及试剂　　补肾

5、益气中药由同济医院中西医结合研究所中药制剂室提供，由桑寄生、黄芪、丹参等组成，采用水煎醇沉工艺制成144%无菌煎济，分装于无菌小瓶中，-20℃冰箱保存。将米非司酮片剂（北京第三制药厂生产）研碎，溶解于丙二醇（国产分析纯）中，配制成0.8mg/ml浓度。SP免疫组化试剂盒、ECL试剂盒为MBI公司产品；PR多克隆抗体为SantaCruze公司产品。　　1.3动物分组及处理　　将雌(32±4g)、雄(40±4g)小鼠分笼适应性饲养3d后，于每日以雌雄2:1的比例合笼，次日8:00检查雌鼠阴道，发现阴栓计为妊娠第1天（pd1）。将孕鼠随机分为正常组、模型组和中药组，每组各6只。于妊

6、娠第4天（Pd4）9：00皮下注射米非司酮0.03mg/kg体重建立胚泡着床障碍模型，正常组皮下注射等量丙二醇溶剂。于妊娠第4天21:00，颈椎脱臼法处死小鼠，迅速剖腹，取出子宫，用于光镜检测、免疫组化及l/L福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色，制作组织切片，光镜观察子宫内膜腺上皮细胞、间质细胞的变化；选用同批染色切片，每张切片在光镜下（×40）随机取5个不同的视野，以每张切片染色的背景作对照，经HPIAS1000病理图文分析系统（同济医学院千屏音像公司）分析，分别测定并计算子宫内膜腺体面积、腺腔面积、腺上皮细胞面积及宫腔上皮厚度。　　1.5小鼠子宫PR免疫组化分析　　将

7、子宫标本制作石蜡切片，采用过氧化物酶标记的链霉卵白素免疫组化法（SP法）染色，检测子宫内膜PR的表达。按照试剂提供的实验步骤进行操作。免疫组化分析结果判断：PR的阳性表达为细胞质呈棕黄色，主要位于子宫内膜腺体、间质细胞内。选用同批染色切片，每张切片在光镜下（×40）随机取5个不同的视野，以每张切片染色的背景作对照，经HPIAS1000病理图文分析系统分析，分别测定并计算子宫内膜腺体、间质、腔上皮细胞的阳性信号所占的各自面积比和平均光度，表示阳性信号的表达范围和表达强度。以PBS代替Ⅰ抗做阴性对照。