中药莪术中抗肿瘤成分莪术醇人工抗原的合成与鉴定

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1、中药莪术中抗肿瘤成分莪术醇人工抗原的合成与鉴定作者：杨新平，陈旭，李芳耀，阮方，林家逊，钟海雁【摘要】　　目的合成莪术醇全抗原并加以鉴定。方法先用莪术醇与琥珀酸酐为原料，以三氯甲烷为溶剂，4-二甲基氨基吡啶(DMAP)作催化剂，反应合成半抗原莪术醇琥珀酸单酯，然后，用1-乙基-3（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺法将莪术醇琥珀酸单酯偶联到牛血清白蛋白，合成了莪术醇的人工抗原，并用激光解析飞行质谱（MALDI-TOF-MS）进行了鉴定，利用质谱特征求得了偶联物中莪术醇与牛血清白蛋白的量，计算出结合比。结果成功地合成

2、了莪术醇人工抗原，其结合比为19.6。结论用1-乙基-3（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺偶联法可合成莪术醇的完全抗原。【关键词】莪术；莪术醇；1-乙基-3（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺；人工抗原；莪术醇琥珀酸单酯　　Abstract：ObjectiveTosynthesizeandidentifytheartificialantigenofcurcumol.MethodsFirstly，ahaptenofcurcumol,curcumol-hemisucinate(Cur.-HS)aterialofcurcum

3、oltoreactandtrace4-dimethylaminopyridine(DMAP)ascatalyst.Thenthehaptenalbumin(BSA)using1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide,(EDC)methodandthecharacterizationoftheantigeninedbyMALDI-TOF-MS,andtheconjugationratioofcurcumoltoBSAinedoltoBSAolissuccessf

4、ullysynthesizedbyEDCmethod.　　KeyaZedoariae；Curcumol；EDC；Antigen；Curcumol-hemisucinate　　莪术是姜科植物蓬莪术CurcumaphaeocaulisVal.、广西莪术Curcumakaol），又名姜黄环醇，是从莪术挥发油中提取出来的倍半萜类化合物，莪术醇是莪术油中有效成分之一，其药理作用主要集中在抗癌，抗菌和抗病毒等方面；莪术醇可作为莪术及莪术油质量评价依据之一［2］；目前检测莪术醇的方法主要有比色法、红外分光光度法、双波长薄层

5、扫描法、气相色谱法［3］。比色法特异性不强，易受其他因素的影响；后几种仪器检测法都需要特定的仪器，对测定样品的前处理复杂，检测成本高，均不适合大批量样品的精确测定，故需要一种高效、快速、便捷的检测方法。　　基于抗原抗体反应的酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）具有快速、特异性强、灵敏度高、操作简便，本法适合大规模检测，已被广泛应用于农药、激素及其他化学污染物、残留物的检测；国内外有　　2.4莪术醇琥珀酸单酯（Cur.-HS）结构的确定用MS谱和13C-

6、NMR谱确定Cur.-HS的结构。从Cur.-HS的MS（APCI）m/z：337.14（M-），推出其分子量为336，初步认为Cur.-HS为合成的目标产物；再分别测出原料莪术醇、Cur.-HS的13C-NMR谱，比较Cur.-HS的13C-NMR与原料莪术醇的13C-NMR不同，发现产物多出δ172.48，169.15，30.2，29.13，共4条谱线，其中δ169.15为莪术醇成丁二酸单酯后酯羰基碳原子，δ172.48为莪术醇成丁二酸单酯链羧基羰基碳原子，而δ29.13，δ30.2，为丁二酸单酯链中的2

7、个亚甲基碳原子。结合MS的数据，对原料莪术醇和合成出的产物的碳谱的化学位移数据的差异分析表明，从而确定合成出的产物就是所要合成的目标产物Cur.-HS。　　2.5Cur.-HS-BSA的MALDI-TOF-MS分析根据MALDI-TOF-MS图谱（见图1～2），可以清晰地判断出Cur.-HS与BSA偶联形成了新的复合物，该复合物的相对分子质量约为73302；对比BSA的相对分子质量（66713）以及Cur.-HS的相对分子质量（336）,可以求出Cur.-HS-BSA的结合比为19.6，本实验中人工合成的半抗

8、原-蛋白复合物Cur.-HS-BSA的结合数值较大，每个载体蛋白分子平均与19.6个半抗原分子结合，说明半抗原与载体的偶联情况良好，这为后续的抗Curcmol抗体的制备提供了可靠的试验基础。　　3讨论　　莪术醇为小分子天然化合物，相对分子量236.35，仅具有反应原性，需要与大分子蛋白质等偶联形成复合物后才有免疫原性，但小分子化合物必须具有或衍生出能与载体进行交联反应的功能基团（如氨基、羧基、重氮基