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1、肺栓塞动物实验模型简述论文【摘要】肺栓塞(pulmonaryembolism,PE)是内源性或外源性栓子阻塞肺动脉引起肺循环障碍综合征，临床的误诊率和死亡率均很高。目前主要进行的是回顾性分析研究，以动物实验研究为主，肺栓塞的动物模型制备方法主要包括体内血栓形成法和体外血栓形成法两种。【关键词】肺栓塞疾病动物模型1前言肺栓塞(pulmonaryembolism,PE)是内源性或外源性栓子阻塞肺动脉引起肺循环障碍的临床和病生理综合征。PE的栓子99%为血栓性质1。其病理、病理生理、临床表现与血栓的大小、形状及堵塞肺血管床的部位和范围有关,因而表现出不同的临床类型,即猝死型、急性肺心病型、肺梗
2、塞型和不可解释的呼吸困难型2。在全世界范围内,急性血栓性肺栓塞及其原发病深静脉血栓形成的罹患者已达数百万,且发病急、病情重,严重威胁着人类的生命和健康3。2肺栓塞病生理目前对肺栓塞的病理生理学改变已有广泛研究,其变化复杂多变,主要是影响呼吸系统、血流动力学及血管内皮功能，从而产生一系列心肺功能异常及血管内皮功能的改变4,引发多种临床表现，严重者可危及生命。影响PTE的严重程度主要取决于以下三方面因素：(1)栓子的大小、栓塞的部位和程度多发栓子的递次栓塞间隔和栓子溶解速度等栓塞相关因素。(2)神经-体液因素:栓子表面的血小板活化并脱颗粒，释放各种血管活性物质，如5-羟色胺、血栓素A2、组织
3、胺、血小板活化因子和12-脂氧化酶产物等。同时此后两者又可诱发中性粒细胞释放血小板活化因子和花生四烯酸代谢产物。上述各种介质具有收缩肺血管作用,使肺动脉压力增高和血管通透性改变5。近期国内发表的一组动物实验结果显示,PTE（肺动脉血栓栓塞）后有血栓形成,.freell注射器相连,注射器内吸取有0.6ml凝血酶（10NIH凝血酶U/ml）,开启动脉插管和注射器之间的通道,使血液流入注射器内1ml,关闭该通道,取下注射器振摇数次,使凝血酶和血液充分混匀,然后将凝血酶处理后的血液再通过三通管注入颈静脉,注意此时一定要夹闭颈静脉10min,待血栓形成后,移去静脉夹,释放栓子,栓子随血液流动到达肺
4、动脉,即可形成肺栓塞模型。由于该法模拟了肺栓塞发病时的血液高凝状态,所以更能较体外血栓形成法准确反映机体状况,但该法形成肺栓塞后的长期观察却鲜有报道,肺栓塞形成后血管的复通率、模型的持久性等问题仍有待于进一步研究探讨。②碘标记法（Lodogen法）国外近年来常用I标记纤维蛋白原后,再把含有125I的纤维蛋白原和凝血酶混合,制成125I标记的血凝块,然后注入动物体内,标记常用Lodogen法14,具体步骤如下:取Lodogen液,用三氯甲烷溶解，室温下氮气吹干制成反应管,加入纤维蛋白溶液,立即加入Na125I11.1×10Bq,充分振荡混匀,标记反应混合物加至凝胶柱层析脱碘,磷酸缓冲液洗脱
5、。留取标记纤维蛋白原峰洗脱液,-20℃保存备用,控制放射性比活度在2.78×10Bq/mg左右确保纤维蛋白原有良好的凝血酶活性。然后在枸橼酸钠抗凝新鲜人全血中顺序加入125I纤维蛋白原、CaCl2和人凝血酶,混合液用聚乙烯管迅速抽吸混匀,37℃温育20min在管内形成条状125I血栓，转移至三角烧瓶用生理盐水振荡漂洗。漂洗后将125I血栓切成等长小条,分别测量和记录放射性。用该法可测定肺、心等125I血栓存在部位的放射性，以反映该部位血栓的溶栓率,也可收集粪、尿、血,测定其放射性,反应其排泄率和回收率,该法定位、定量准确,是目前最为理想的肺栓塞方法,但是对实验室要求程度高,且I对纤维蛋白
6、原的活性有一定影响,过高的放射性可使凝血块的稳定性降低。梁心平等认为将放射比活度定为2.78×10Bq/mg最为理想，在此条件下洗脱20min,洗脱液中放射性稳定接近于零水平15。3.2小鼠肺栓塞模型小鼠肺栓塞的模型采用尾静脉注射含胶原10ug和肾上腺素5ug的混合液100ul,引起动物死亡或麻痹,Diminno等认为,死亡或麻痹是由于胶原和肾上腺素引起肺血小板血栓形成和血管收缩,导致呼吸阻断,大量血小板形成血栓引起循环血小板量减少,聚集的血小板进一步释放TXA和PGFa加重呼吸障碍,引起动物死亡16。该模型制备方法简便,操作步骤易行性高,且费用低廉,可用于大规模样本的实验研究,尤其是药
7、物对肺栓塞模型的影响及其保护率。3.3犬肺栓塞模型犬的急性肺栓塞模型多采用体外自体血凝块,具体方法:动脉采血60～100ml(5ml/kg),加入含凝血酶的玻璃皿中,静置凝固2h,用刀片将血栓纵横切成小块,大小约(10×10×5)mm3,弃血清后装入注射器中,反复经右颈静脉注入栓子，维持肺动脉收缩压于50～66mmHg(1mmHg=0.133kPa),一旦低于50mmHg,再次注入栓子,过程持续30min,其后稳定1h。由于该法操作
