吡咯烷二硫氨基甲酸酯对大鼠胃缺血-再灌注损伤的影响论文

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1、吡咯烷二硫氨基甲酸酯对大鼠胃缺血/再灌注损伤的影响论文张咏梅胡霞周晓燕张建福石玥马小波乔伟丽【摘要】目的研究核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)对大鼠胃缺血/再灌注(gastricischemia/reperfusion,GI/R)损伤的影响。方法采用夹闭大鼠腹腔动脉30min，去除动脉夹再灌注1h的GI/R损伤模型，于静脉注射PDTC后，肉眼计数胃黏膜损伤指数，并运用免疫组化及TdT介导dUTP缺口末端标记(TUNEL)实验技术，观察PDTC对大鼠GI/R后胃黏膜细胞坏死、增殖和凋亡的影响。结果夹闭大

2、鼠腹腔动脉30min再灌注1h后可造成胃黏膜明显损伤，静脉注射PDTC200mg/kg可明显减轻GI/R损伤，并使胃黏膜细胞增殖增加、凋亡减少。结论静脉注射PDTC对GI/R损伤具有保护作用.freelateammonium(PDTC,anuclearfactorκBinhibitor)ongastricischemia/reperfusion(GI/R)injury.MethodsGI/Rinjurypingtheceliacarteryfor30minandthenreperfusingfor1h.Aftertheinjec

3、tionofPDTC(200mg/kg,i.v.),thegastricmucosalinjuryindexucosalcellularproliferationandapoptosismunohistochemicalandTdT-mediateddUTPnick-endlabeling(TUNEL)methodsinrats.ResultsThegastricmucosaucosa.ConclusionPDTCcansignificantlyprotectagainstGI/Rinjurybypromotingcellula

4、rproliferationandinhibitingcellularapoptosisingastricmucosa.Keyia/reperfusion(GI/R);PDTC;proliferation;apoptosis胃缺血/再灌注（gastricischemia/reperfusion,GI/R）损伤的发生与多种因素有关，如胃黏膜内氧自由基生成过多、内皮素水平升高、胃微循环障碍、白细胞浸润、一氧化氮释放、胃酸分泌增多、前列腺素合成减少等［1-2］。我们前期的研究也表明GI/R后胃黏膜丙二醛(MDA)含量、胃液酸度和胃蛋白

5、酶活性增加，胃黏膜超氧化物歧化酶(SOD)活性明显低于正常对照组［3］，核因子κB(NF-κB)活化及核转位，说明氧自由基及NF-κB均参与GI/R的损伤过程［4-5］。吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)是一种低分子巯基化合物，已广泛应用于临床和基础研究。PDTC有多种生物学活性，如作为重金属的鳌合剂和酶的抑制剂。PDTC还具有抗氧化的作用，从而可对抗氧自由基对组织的损伤。此外，PDTC也是NF-κB信号通路的抑制剂，可抑制NF-κB的活化及核转位［6-7］。由于氧自由基和NF

6、-κB的活化均参与GI/R损伤过程，因此我们推测静脉给予PDTC后可能对GI/R损伤具有保护作用。因此，本研究通过建立GI/R模型，应用免疫组化等方法，探讨了静脉给予PDTC后对GI/R损伤的影响及可能的作用机制。1材料和方法1.1试剂PDTC购自美国Sigma公司，PA(anti-proliferatingcellnuclearantigenantibody)小鼠单克隆抗体、Poicon公司；其他试剂均为市售化学纯。1.2实验动物及分组成年健康Sprague-Da组）、GI/R组、PDTC+GI/R组。PDTC用生理盐水溶解，

7、采用200mg/kg剂量，于GI/R前20min经股静脉给药。1.3GI/R动物模型的制备按DA含量，从而减轻小肠缺血/再灌注损伤，说明PDTC对肠缺血/再灌注损伤的保护作用与其抗炎和抗氧化作用有关［6］。PDTC还可明显减轻心肌、脑、肺、肝脏、骨骼肌和肾脏等器官的缺血/再灌注损伤，其作用机制与抑制NF-κB的活化和核转位、抑制氧自由基的生成有密切的关系［10-13］。ElEter等［14］亦发现PDTC通过抑制NF-κB的活性，减少TNF-α等细胞因子的表达来减轻胃缺血/再灌注损伤。但目前尚未见到PDTC对GI/R后胃黏膜细胞

8、凋亡和增殖影响的报道。因此，本研究采用了免疫组化（检测PA）、TUNEL等方法，观察整体情况下PDTC对胃黏膜细胞凋亡和增殖的影响。结果发现，正常胃黏膜存在一定数量的凋亡细胞和增殖细胞。增殖细胞主要表达在胃黏膜上中1/3处附近，即胃腺颈区，组织学上认为，此部位是