当归加玻璃酸钠关节腔注射对兔膝骨关节炎软骨细胞bcl2、bax表达的影响论文

《当归加玻璃酸钠关节腔注射对兔膝骨关节炎软骨细胞bcl2、bax表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、当归加玻璃酸钠关节腔注射对兔膝骨关节炎软骨细胞Bcl2、Bax表达的影响论文刘仕良杨帆段祥林易晨阳【摘要】目的：研究当归注射液结合玻璃酸钠注射液关节腔注射对兔膝骨关节炎软骨软骨细胞Bcl2、Bax表达的影响。方法：健康家兔50只随机分为5组,正常对照组、模型对照组、当归组、玻璃酸钠组、当归与玻璃酸钠结合组，每组10只，后4组按Hulth方法建立兔膝骨性关节炎的动物模型，术后每周经膝关节穿刺给药1次，连续给药6周后处死、取材，关节软骨作大体及光镜观察，检测软骨细胞Bcl2(Bcelllymphom

2、as,B淋巴细胞2蛋白)、Bax（Bcl2AssociatedXprotein,B淋巴细胞2的相关X蛋白）的表达灰度。结果：各药物预防组动物关节软骨的大体观察评分、组织学评分、软骨细胞Bax的表达灰度均低于模型组（均P0.01），软骨细胞Bcl2的表达灰度均高于对照组（均P0.01）.freelhyaluronate，SH)与当归注射液（Angelica，AG）关节内注射均具有防治OA的作用［1，2］，但效果均有限。本实验采用SH与AG结合用膝关节腔内注射，观察其对兔膝骨关节炎软骨细胞Bcl2

3、、Bax表达的影响，并对相关机制进行探讨。1材料与方法1.1药物、试剂与仪器25%当归注射液（武汉大学中南医院制药厂），SH注射液(25g/2.5l，上海麦迪克医学科技公司)；Bcl2蛋白、Bax蛋白抗体，SABC、DBA试剂盒（武汉博士德）。765紫外分光光度计(ShimadzuUV12002)，HPIAS_1000高清晰度彩色病理图像分析系统（同济千屏）。健康家兔50只，22～30kg，雌雄兼用（武汉大学实验动物中心提供），随机分为5组:正常对照组、模型对照组、当归组、玻璃酸钠组、当归与玻璃酸钠

4、结合组。1.2实验过程及给药方法参照文献［3］方法，建立Hulth兔右膝关节OA模型，术后不固定伤肢，分笼饲养。术后1周开始每周进行右膝关节腔穿刺给药1次，连续给药6周。模型对照组给药量为生理盐水0.3ml/只，当归组给药量为当归0.15ml/只，SH组给药量为0.15ml/只，当归与玻璃酸钠结合组给药量为当归0.15ml加玻璃酸钠0.15ml/只。各组给药体积均以生理盐水或交互配为0.3ml。给药6周后处死动物。1.3取材、处理与检测动物处死前经耳缘静脉取3ml，肝素抗凝3000r/min离心取血浆，

5、取血后气栓法处死。将兔空气栓塞致死后，立即切开右膝关节腔，大体观察滑膜软骨的病变。然后取膝前正中部的滑膜组织约200mg，用冰冻的生理盐水冲洗去血液，滤纸试干，放入2ml冰生理盐水中。剪碎滑膜组织块，倒入玻璃匀浆管中冰生理盐水下匀浆，制成10%的组织匀浆，以3000r/min离心10min，取上清液保存于-70℃冰箱。切开右膝关节时，切下右侧胫骨上端外侧平台，常规固定、脱水、包埋、切片（免疫组化切片行多聚赖安酸处理），HE及甲苯胺蓝染色，光镜观察软骨的改变。Bcl2、Bax蛋白的表达采用免疫组化方法进

6、行检测，方法步骤按照各试剂盒说明进行。图像分析处理：在40倍显微镜下随机选取8个不重叠的视野，测定阳性细胞的灰度值，取每张切片均值作为其测量值。1.4统计学处理全部数据经t检验处理，用(±s)表示，以P0.05为差异有统计学意义。2实验结果2.1肉眼及手术显微镜下观察除模型组9例软骨表面粗糙、失去光泽外，其余动物软骨表面的颜色、光泽、光滑度及关节液的颜色、多少等均未见异常改变。按Mankin's关节软骨大体评分标准［4］评分，模型组与其它各组有显著差别(P0.01)，正常组与各药物预防组间比较无明显差异

7、（均P0.05）。2.2光镜观察HE、甲苯胺兰染色及评分模型组切片光镜观察：软骨表面有小裂纹与溃疡，细胞明显增生，大小不一，四层结构紊乱，潮线不清晰或多重，甲苯胺兰染色重度降低；正常组切片光镜观察：软骨表面光滑、完整，细胞排列整齐，四层结构清晰，潮线清晰完整，甲苯胺兰染色基本正常。AG、SH、SH+AG3组切片光镜观察：软骨表面光滑、完整，细胞排列稍有紊乱，四层结构清晰，潮线清晰完整，甲苯胺兰染色着色正常或轻度降低。按Mankin's标准评分并进行统计（表1），结果显示：与模型组比较时，AG、SH、SH

8、+AG3个治疗组均降低了Mankin's评分（P0.05，P0.05，P0.01），SH+AG治疗组与AG、SH两组有明显差异（均P0.05）。表1各组软骨组织mankin's评分注：与模型组比较，#P0.05；*P0.01。2.3免疫组化及图像分析切片用DBA染色的阳性结果为软骨细胞胞浆呈棕褐色或棕黄色颗粒，阴性胞浆不着色或仅有背景着色。相对于模型组，AG和SH治疗组软骨细胞Bax表达的灰度值显著降低（P0.01），Bcl2表达的灰度值