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1、基质金属蛋白酶MMP作者：彭惠,洪苏玲,陶永贤,彭彦,姜蓉【关键词】糖尿病视网膜病变；RT ExpressionofmatrixmetalloprotEinase2mRNAinretinaofdiabetichamster 【Abstract】AIM:ToexploretheroleofmatrixmetalloprotEInase2(MMP2)inthedevelopmentofdiabeticretinopathy(DR).METHODS:HamstersodelsbyStreptozotocin(40mg/kg).TotalRNAofretinaRNAinretina
2、iquantitativeRTPCR.Morphologiccharacteristicsandchangesofretinailuminescence.RESULTS:Diabetichamsterdisplayednotonlyhyperglycaemia,butalsohyperlipemia.TheexpressionofMMP2mRNAinretinashoaycontributetothepathogenesisofDR. 【Keyatrixmetalloproteinases；diabetichamster 【摘要】目的：探讨基质金属蛋白酶(MMP2)在糖尿病
3、视网膜病变(DR)发生发展中的作用及其机制.方法：用链脲佐菌素（STZ）诱导苍鼠糖尿病模型，提取视网膜中总RNA，半定量RTPCR观察视网膜中MMP2mRNA表达情况，HE染色观察光镜下视网膜的形态特征及变化，血清学检测苍鼠血清甘油三酯(TG)，总胆固醇(TC)和电化学发光法检测胰岛素水平等变化.结果：糖尿病苍鼠不仅表现为高血糖,还表现为高TG血症.视网膜中MMP2mRNA表达呈升高趋势,与正常对照组相比于造模后16g/kg体质量,连续3d.德国拜耳公司快速血糖仪测定尾尖血空服血糖(氧化酶试纸法),血糖稳定7d后,选用血糖>13.5mmol/L的仓鼠为糖尿病(DM)仓鼠(
4、13只).实验持续16连续切片，按HE染色常规操作进行，观察每组视网膜在光镜下的形态特征及其变化. 1.3血清学检测全自动生化分析仪测定仓鼠静脉血血清甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC).电化学发光法检测胰岛素水平. 1.4视网膜中总RNA制备实验动物于16in，94℃1min,49℃50s,72℃45s共27个循环，72℃延伸5min，扩增产物长度为169bp；β肌动蛋白引物在扩增5个循环后加入，长度为500bp.15g/L琼脂糖凝胶电泳，BioRAD凝胶成像系统照相，SXimage软件分析，MMP2mRNA含量用MMP2与β肌动蛋白吸光度×面积的比值表示. 统计学处理：
5、本研究数据以x±s表示，采用两样本均数比较的t检验进行统计学分析. 2结果 2.1两组血糖及体质量的变化实验开始时,NC组和DM组仓鼠体质量分别为(123±6)g和(125±5)g,两组差异无统计学意义(P>0.05).实验结束时,NC组体质量(133±10)g与实验开始时无显著变化(P>0.05),而DM组仓鼠体质量在实验第16mol/L;糖尿病组TG为6.54±2.04,明显高于正常对照组(P<0.01);而TC水平(5.21±2.07)mmol/L与正常对照组的差异无统计学意义(P>0.05). 2.4糖尿病组MMP2mRNA的表达电泳鉴定R
6、NA无明显降解.A260/280比值为1.8~2.0，实际浓度0.4~1.0g/L，与正常对照组相比，糖尿病组苍鼠视网膜中MMP2mRNA表达呈升高趋势(图4)，t值为23.12，差异有统计学意义(表2).表2NC组和DM组苍鼠MMP2mRNA表达水平(略) 3讨论 STZ是一种胰岛β细胞毒性物质，可选择性诱导β细胞调亡，使葡萄糖-胰岛素分泌耦联失调.本文显示注射STZ成模后，多数病鼠血糖升高，胰岛素下降，观察期间出现多饮、多食、多尿及活动减弱等现象.但也有部分病鼠血糖渐恢复正常.此与四氧嘧啶糖尿病模型长期随访观察的结果相一致［1］.因此，长期观察的实验中，应注意随访血糖.
7、本实验选用仓鼠作为实验动物,因为仓鼠在脂质代谢等方面与人类相似,且Simionescu等［2］给雄性Syrian仓鼠注射STZ成功诱发了糖尿病模型，本实验观察到,糖尿病仓鼠不仅表现为高血糖,还表现为高TG血症. DR是糖尿病的严重并发症之一，表现为微循环结构及功能上的紊乱，最终新生血管的形成.而在血管内皮细胞迁移和增殖过程中，内皮细胞周围的ECM必须有选择地降解，控制这一活动主要的就是MMPs家族.MMPs是一族参与ECM降解、其活性依赖金属离子Zn2+的复杂蛋白酶家系.主要分为4大类：①
