献血者ebv、hhv6和hhv7 dna检测对输血意义论文

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1、献血者EBV、HHV6和HHV7DNA检测对输血意义论文杨永洁尼宏莉李欣王笑峰王云于琦罗兵【摘要】目的了解青岛地区献血者单个核细胞（PBMC）和唾液标本中EB病毒(EBV)、人疱疹病毒6型(HHV6)和人疱疹病毒7型(HHV7)的感染情况。方法采用PCRSouthernblotting检测109名健康无偿献血者外周血PBMC和唾液标本中EBVDNA，巢式PCR技术检测HHV6和HHV7DNA，限制性酶切分析分别对HHV6、HHV7进行分型和鉴定。结果109名献血者外周血PBMC中EBVDNA检出率为21.10%(23/109)，

2、HHV6DNA检出率为50.46%(55/109)，HHV7DNA检出率为57.80%(63/109)。唾液标本中EBV、HHV6和HHV7DNA检出率分别为24.77%(27/109)、66.06%(72/109)和90.83%(99/109)。PBMC中EBV、HHV6和HHV7均阳性者7例，占6.4%；唾液标本中均阳性者17例，占15.6％。酶切分析结果显示，55例献血者外周血PBMCHHV6阳性标本中HHV6A型占18.2%(10/55).freelononuclearcel1s(PBMC)andsalivasamples

3、inblooddonor.MethodsPCRSouthernblottingethodtodetectHHV6andHHV7DNA;restrictionmaptotypeandidentifyHHV6andHHV7.ResultsOfthe109blooddonors,thedetectionratesofEBVDNA,HHV6DNAandHHV7DNAinPMBCs,EBV,HHV6andHHV7,.freeleanalysisrevealedthat18.2%(10/55)ofHHV6AinPBMCand16.7%(1

4、2/72)insaliva,81.8%(45/55)ofHHV6BinPBMCand83.3%(60/72)insaliva.ConclusionPeripheralbloodmononuclearcel1sandepithelialcellsofpharynxoralisaretheimportantlatentsitesforEBV,HHV6andHHV7.CoinfectionofEBVan;herpesvirus6,human;herpesvirus7,human;bloodtransfusion输血治疗是临床医学的重要手段之一，

5、但输血并不是有益无害的治疗手段，也不是绝对安全的1。输血所致病毒感染一直为国内外输血界所关注，因此，与输血相关的病毒感染的危险性及检测病毒基因组的价值已成为医学领域中一个研究热点2。EB病毒（EBV）、人疱疹病毒6型（HHV6）和7型（HHV7）同属于人疱疹病毒科，原发感染后在宿主体内长期潜伏，可因输血或某些症状性疾病而激活，增加其再活动的危险度。大部分健康成人感染并携带EBV、HHV6和HHV7，病毒可持续存在于外周血细胞和唾液腺细胞中，而且唾液中可分泌具有感染性的病毒颗粒，对人体产生持久而稳定的感染。本研究采用PCRSouthern

6、blotting检测109名健康无偿献血者外周血单个核细胞(PBMC)和唾液标本中EBVDNA，巢式PCR(nestedPCR)技术结合限制性酶切分析检测其HHV6和HHV7DNA，以调查献血员EBV、HHV6和HHV7的感染状况，分析其是否存在共感染及对输血的意义。1材料与方法1.1样本来源随机采集青岛地区109名无偿献血者外周静脉血10mL(枸橼酸钠抗凝，比例1∶9)和唾液5mL。109名献血者丙氨酸转氨酶（ALT）≤25U(赖氏法)，HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒螺旋体抗体均阴性，其他项目也均符合国家规定献血标准。1.2

7、标本DNA的提取枸橼酸钠抗凝血分离PBMC，唾液标本离心取沉淀，分别加入2mL裂解缓冲液（含10mmol/LTrisHCl，150mmol/LNaCl，10mmol/LEDTA，100mg/L蛋白酶K，1g/LSDS），55℃消化2h。采用酚氯仿异戊醇法常规提取细胞DNA，干燥后以TE缓冲液（pH8.0）溶解，4℃保存备用。1.3EBV、HHV6和HHV7DNA的检测EBV特异性引物和探针参照文献3设计，上游引物序列为5′CCAGACAGCAGCCAATTGTC3′，下游引物序列为5′GGTAGAAGACCCCCTCTTAC3

8、′，探针序列为5′CCCTGGTATAAAGTGGTCCTGCAGCTATTTCTGGTCGCATC3′，扩增产物的长度为129bp