肺炎衣原体抗体的制备及应用

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1、肺炎衣原体抗体的制备及应用作者：王卫群张瑞华余竹元【摘要】目的肺炎衣原体抗体(Cpn-PcAb)的制备及应用。方法用10μlCpn菌株TcAb)同时检测病人外周血标本294例。另外，分别从Cpn-PcAb检测出Cpn特异性抗原阳性的外周血单核细胞(PBMC)标本(A组)中和对照组(B组)中随机各挑选20例，用PCR检测PBMC中的Cpn-DNA。结果Cpn-PcAb检测的阳性率为45.9%(135/294)，Cpn-McAb检测的阳性率为43.5%(128/294)，两种抗体同时阳性的标本有110例，Kappa值是07，根

2、据其判断标准提示两者有较高的一致性。A、B两组Cpn-DNA阳性标本分别为17例和3例。结论Cpn抗体几乎和Cpn单抗一样有较高的特异性和敏感性，可能可以替代进口单抗用于临床Cpn感染的检测，有助于相关疾病的诊治。【关键词】肺炎衣原体多克隆抗体肺炎衣原体单克隆抗体微量免疫荧光外周血单核细胞Productionandapplicationofpolyclonalantibodytochlamydiapneumoniae【Abstract】ObjectiveProductionandapplicationofpolyclonal

3、antibodytochlamydiapneumoniae(Cpn).MethodsTheNeantibodytiterof1∶64ensionalimmunodiffusiontest.IgGserumandpurifiedbyammoniumsulphatesaltingoutandDEAE-SephadexA-50chromatography，thenensof294patientsonoclonalantibody(Cpn-PcAb)fromUSAatthesametime.Ontheotherhand，lysele

4、cted20peripheralbloodmononuclearcell(PBMC)specimensepositiveforthem，sho(Kappa=0.7).ThespecimensofpositiveCpn-DNAostthesamehighspecificityandsensitivityasCpn-McAb.TheCpn-PcAbmaybereplaceCpn-McAbtodetecttheCpnspecificantigenandbehelpfultodiagnoseandtreattheclinicaldi

5、seasesassociatedydiapneumoniae(Cpn-PcAb)monoclonalantibodytoCpn(Cpn-McAb)micro-immunofluorescenceperipheralbloodmononuclearcell肺炎衣原体(Chlamydiapneumoniae，Cpn)是嗜衣原体(Chlamydohilapneumoniae)属下的一个种，是一种常见的呼吸道病原体，带菌者和隐性感染者非常普遍［１，２］。近年来在多种系统疾病患者血清中检出的Cpn-抗体均显著高于相应对照组［3］，如心

6、血管系统、呼吸系统、血液系统疾病等，因此Cpn已成为危害人类健康的一种病原体，尤其是它在动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)形成过程中的作用日益受到国内外学者广泛关注。Cpn感染和AS之间的关系已为血清流行病学、病理学和分子生物学等实验技术所证实［4］。笔者亦建立了外周血单个核细胞中Cpn-抗原的检测方法［5］，并用于临床检测，为临床相关疾病的诊治提供可靠依据。但是，目前检测Cpn-抗原所用的单抗主要依赖进口，为此笔者尝试用家兔自制抗Cpn抗体，并已获得成功，现将结果报道如下。1材料与方法1.1兔抗肺炎衣原体

7、抗体的制备用10μlCpn菌株TSO)溶液，使终浓度为1mgFITC/1mlDMSO。按50μgFITC/1mgIgG比例将FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗体溶液中。标记物用pH9～9.5碳酸盐缓冲液加至2.5ml，再将其装入透析袋，并放在预冷4℃的碳酸盐缓冲液中，于4℃暗处磁力搅拌过夜。然后用PBS于4℃暗处透析5次，以除去游离的FITC，直至透析外液与参比溶液PBS在495nm处吸光度一样。FITC标记物分别在276nm和493nm测定光密度，然后根据计算图算出荧光素(F)与蛋白(P)mol比值，合适的F/P比值

8、为2～4。1.3Cpn-PcAb与Cpn-McAb同时检测标本复旦大学附属金山医院住院患者共294例，其中冠心病、高血压、心肌梗死、糖尿病等患者109例，肺炎、支气管炎、哮喘、肺气肿等患者135例，慢性鼻炎、鼻息肉、鼻窦炎、咽喉炎、扁桃体炎等患者50例。常规无菌采集静脉血3ml，EDTA抗