三七茎叶中叶苷及黄酮的同步分离工艺研究论文

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1、三七茎叶中叶苷及黄酮的同步分离工艺研究论文【摘要】目的探索分离三七茎叶中的叶苷和总黄酮的工艺条件及参数。方法以静态饱和吸附量、动态比吸附量、比洗脱量为考察指标，比较不同大孔树脂富集纯化三七茎叶叶苷和总黄酮的性能，并对最佳树脂纯化工艺进行筛选。结果AB-8树脂综合性能最佳，其吸附分离工艺条件为：上样液浓度为叶苷1.8060mg/ml,.freelg/ml，上样液以1.0BV/h吸附流速上样，纯水冲洗，60%乙醇洗脱后，再用95%乙醇洗脱。结论经大孔树脂纯化后的三七茎叶有效部位中.freell，即每毫升含人参皂苷Re2.0mg。2.2.2样品测

2、定精密吸取待测液1.0ml于蒸发皿，置于60℃水浴挥干；同样精确吸取人参皂苷Re标准溶液0.1ml于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干。在已挥干的蒸发皿中，分别准确加入0.2ml质量分数为5%的香草醛冰醋酸溶液，0.8ml高氯酸，混匀后移入5ml具塞刻度离心管中；于60℃水浴加热10min，取出后用流水冷却，再准确加入5.0ml冰醋酸溶液摇匀，以1cm比色池于560nm波长处测定吸收值［4］，并通过下式计算求出含量。叶苷含量（mg/ml）=对照品量×A样/A对样品体积式中：A样，样品吸收值；A对，对照品吸收值；对照品量，标准管人参皂苷Re的量(m

3、g)；样品体积(ml)。2.3黄酮含量测定［4］采用分光光度计法测定总黄酮含量，即利用黄酮类化合物与铝盐反应，产生红色络合物，以芦丁为对照品于500nm波长处测定吸收值。2.3.1标准溶液的配制［5］精密称取于120℃干燥至恒重的芦丁对照品48.35mg置于50ml容量瓶中，加乙醇溶解至刻度，摇匀，精确吸取此溶液10.0ml置于50ml容量瓶中，再加水至刻度，摇匀，即得标准溶液。2.3.2标准曲线的制作精密吸取芦丁标准溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml分别置于25ml容量瓶中，各加水至6ml，再加入5%的亚硝酸钠溶液1.

4、0ml，混匀，放置6min，加入10%硝酸铝溶液1.0ml，混匀，放置6min，加入4%氢氧化钠10.0ml再加水至25ml，放置15min（不加芦丁作空白对照）。按分光光度计法在500nm波长处测定吸收值。所取标准溶液的浓度和吸收度数据经回归处理，得回归方程：A=0.2196C－0.0112，其线性范围为0～0.6mg相关系数r=0.9993。2.4上柱液的制备及预处理取干燥的三七茎叶，用70%乙醇溶液为溶剂，料液比为1∶50（g∶ml），回流提取1.5h，提取2次，合并提取液，通过减压蒸馏回收乙醇溶液，得到的固形物用一定量的热蒸馏水溶解

5、、过滤后作为样品溶液，总黄酮浓度为1.5704mg/ml，叶苷浓度为3.6120mg/ml。2.5不同型号树脂筛选2.5.1大孔吸附树脂预处理先将树脂放在水中浸泡，除去浮在表面的树脂(反复几次)，再用95%乙醇浸泡24h，使树脂充分溶胀，湿法装柱。用95%乙醇以2BV/h的流速通过树脂层，流至流出液加蒸馏水不变白色浑浊为止。再用蒸馏水以同样流速洗尽乙醇。将5%的盐酸溶液以4～6BV/h流速通过树脂层，并浸泡2～4h，然后用蒸馏水以同样流速洗至中性，再用2%的NaOH溶液以4～6BV/h流速进行碱洗，用去蒸馏水洗至中性即处理完毕。2.5.2静

6、态吸附试验由于三七叶苷和黄酮的极性较弱，根据相似相溶原理，弱极性的化合物更易被弱极性的树脂所吸附，故本实验选择D101（非极性）、AB-8（弱极性）、HPD-100（非极性）作为备选树脂。在带塞的锥形瓶中，各加入取处理好的树脂1ml和150ml上柱液于25℃恒温摇床中，振荡24h，充分吸附后，过滤，取滤液，分别按“2.2”和“2.3”项下方法测定样品吸附前后叶苷和总黄酮的浓度,按下式计算各种树脂的静态饱和吸附量(mg/ml湿树脂)。吸附量（mg/ml）=C0-Cr上-M残-M水洗上为上柱液中指标成分的含量，M残为流出液中指标成分含量；M水洗

7、为水洗脱液中指标成分含量；洗脱洗脱为洗脱液中指标成分的含量，］.昆明：云南科技出版社，1996：31.［2］吴少雄，王保兴，郭祀远,等.三七叶苷的提取分离与纯化［J］.食品与发酵工业，2005，31(1)：149.［3］聂丽，罗万芳，王兴文.大孔树脂分离纯化三七黄酮类成分研究［J］.云南中医学院学报，2007，30（1）：10.［4］张素琼，侯晋军，李青山.大孔吸附树脂同步分离纯化罗布麻叶总黄酮和总鞣质的研究［J］.中国中药杂志，2008，33（10）：1141.［5］陈业高.植物化学成分［M］.北京：化学工业出版社，2004：175.