hif和vegf在低氧性肺动脉高压中的调控作用论文

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1、HIF和VEGF在低氧性肺动脉高压中的调控作用论文【摘要】目的:观察低氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白在低氧性肺动脉高压小鼠肺内的表达，探讨HIF和VEGF在其中的调控作用。方法:建立低氧性肺动脉高压小鼠模型，SPF级雄性C57BL/6小鼠16只，随机分为正常对照组（C组），低氧、高二氧化碳4iceonaryhypertensioninducedbychronichypoxichypercapnia,andinvestigatealeC57bl/6micelydividedintoteasured.Lu

2、ngsectionsatoxylinandeosin(HE)formorphologicstudiesunderlightmicroscope.TheexpressionofHIF-1αproteinandVEGFproteinofpulmonaryarteriolesmunohistochemistry.Results:①ThevaluesoftheRVSP,RV/LV+SingroupHonaryarteriolesofgroupHoothmusclecellsintunicamediaensofthepulmonaryarteriol

3、esicroscope.③BothHIF-1αproteinandVEGFproteinstainingonaryarteriolesofgroupHmunohistochemistry.TheaverageopticaldensityofHIF-1αandVEGFproteinmunohistochemistryinthepulmonaryarteriolesingroupHonaryhypertensioninmice.Keyonary;hypoxia;hyperoapnia;mice慢性阻塞性肺疾病(chronicobstructiv

4、epulmonarydiseaseCOPD)是一种具有气流受限特征的疾病，随着病情的进展，长期慢性低氧可导致肺血管广泛收缩和肺动脉高压，常伴有血管内膜增生，血管发生纤维化和闭塞，造成肺循环的结构重组，最终导致右心衰竭。本实验采取常压下直接吸入低氧、高二氧化碳混合气体的方法，建立肺动脉高压小鼠模型，观察低氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白在小鼠肺内的表达，并探讨HIF和VEGF在其中的调控作用。1材料和方法1.1材料SPF级雄性C57BL/6小鼠16只，体重23～27g，温州医学院实验动物中心提供。兔抗小鼠

5、多克隆抗体VEGF、HIF-1α以及SABC试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司，其余均为市售分析纯试剂。1.2模型复制小鼠随机分为对照组（C组）、低氧高二氧化碳4g/kg)腹腔注射麻醉，参照YanliSong等1报告的右心导管插入术，用1.4F标准的Millar超微压力导管(型号为SPR-835)连接Medlab生物信号采集处理系统测右心室收缩压1(rightventricularsystolicpressureRVSP)。测压后开胸取心，剪去心房组织，再沿室间隔剪开，将右心室(RV)和左心室加室间隔(LV＋S)分离，用滤纸吸干血液后分

6、别称重，以RV/（LV+S）重量比作为评价右心室肥大指标。1.4肺细小动脉显微结构观察取右心室和肺组织，用4℃4%多聚甲醛固定4h，然后脱水、石蜡包埋、切片，HE染色，光镜下观察其病理学改变。1.5肺细小动脉HIF-lα、VEGF的免疫组化检测采用链霉亲和素-生物素复合体法（SABC法）。一抗：兔抗小鼠多克隆抗体HIF-lα和VEGF，1:150稀释。操作步骤参照说明书的方法，稍有修改。每只小鼠任选2张肺组织切片，每张切片随机选取直径50～150μm的肺细小动脉2条，用图像分析软件（Image-ProPlus）测取所选血管管壁平均吸光度值（

7、averageopticaldensity，AOD）作为肺动脉管壁HIF-lα和VEGF的相对含量。1.6统计学处理方法两样本均数比较采用t检验。两变量的相关分析用直线相关分析法分析。2结果2.1两组小鼠RVSP和RV/（LV+S）的比较由表1可以看出，H组小鼠右心室收缩压明显高于C组，且右心室重量亦有增加。2.2心脏和肺脏的病理学改变光镜下，可见C组小鼠肺细小动脉管壁薄，平滑肌层未见明显增生，管壁均匀一致（见图1）。H组小鼠右心室肥厚且肺内血管壁明显增厚，肺细小动脉中膜平滑肌细胞（SMC）增多，中膜（PAMT）增厚，管腔变窄（见图2）。2

8、.3各组小鼠肺细小动脉HIF-la蛋白，VEGF蛋白免疫组化结果的比较免疫组化表明，H组小鼠HIF-1α蛋白和VEGF蛋白阳性表达主要位于肺细小动脉平滑肌细胞，肺泡上皮细胞及细支