4西南大学网络与绩效教育学院《园艺植物离体培养》作业及答案

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1、《园艺植物离体培养》作业及答案第一批作业及答案名词解释：1、外植体：用于组织培养（离体培养）的植物材料，如根、茎、叶、花药、胚珠等。4.细胞全能性：一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息，植物细胞在适宜条件下具有发育成完整植株的潜在能力。5.胞质杂种：所谓胞质杂种（Cybrid）是指一个物种的细胞质（不包括核基因组）基因与另一个物种的细胞质和胞核基因融合为一体的体细胞杂种产物。填空题6.培养基一般采用（湿热）灭菌。1.连续培养有 开放式连续 培养和 封闭式连续 培养两种方式。1.侵染性病害又根据病原生物的类别分为5类，即：（真菌病害）、（细菌病害）、（病毒病

2、害）、（线虫病害）和（寄生性植物病害）等。2.按照传播方式，植物病害可以分为（气传病害）、（土传病害）、（虫传病害）、（种苗传播病害）。简答22.简述单细胞培养的方法。答：在单细胞培养中，常采用的基本培养方法有看护培养，微室培养和平振培养等几种，它们各有特点，可根据条件和需要选择使用。1.看护培养法：看护培养法是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖的培养方法，这个愈伤组织块称为看护愈伤组织。14这个方法最初是由Muir等（1953）设计的，当时是为了由烟草和金盏花细胞悬浮液和易散碎的愈伤组织中取单分裂的离体细胞，在看护愈伤组织的影响下则可能发生分裂。由

3、此可见，看护愈伤组织不仅给这个细胞提供了培养基中的营养成分，而且还提供了能促进细胞分裂的其他物质。这种细胞分裂因素可通过滤纸而扩散。愈伤组织刺激离体细胞分裂的效应，还可通过另一种方式来证实，把两块愈伤组织置于琼脂培养基上，在它们周围接种若干个单细胞，结果可以看到首先发生分裂的都是靠近这两块愈伤组织的细胞。2.微室培养法：微室培养法是指在无菌小室中培养接有单细胞的液体培养基小滴，使细胞得以生长和增殖成单细胞无性系的无菌培养方法。它是为进行单细胞禁用词语连续观察而建立的一种微量细胞培养技术。微室培养的优点是便于在培养过程中连续进行显微观察，可以把一个细胞生长、分裂、形成细胞团的全过

4、程记录下来。同时它所用的设备，用具比较简单。缺点主要是培养基数量少，因此水分难以保持，培养基中养分及pH值易于变动，多数细胞经短期休眠后往往即不再生长。3.平板培养法：平板培养法是把单个细胞与融化的琼脂培养基均匀混合，并平铺一薄层在培养皿底部的培养方法，此法是Bergman在1960年首创的，它是为分离单细胞无性系，研究其生理生化和遗传上的差异而设计的一种单细胞培养技术。广泛应用于细胞，原生质体及融合产物的培养。在平板培养的整个过程中，必须注意以下几点：A、选用的培养基，无论是条件培养基或是合成培养基，主要的一点，是通过在低的细胞起始密度下使细胞生长。B、不要选取处于静止期的细

5、胞，因为处于分裂旺盛时期的细胞有最高的植板率。C、在固体培养基中适宜的起始密度因植物种类而不同。如烟草细胞的适宜密度为0.5-1.0×104个细胞/ml，若低于此数，植板率显著下降。14D、接种细胞时固体培养基的温度要控制，一般认为不超过35℃，但也有人认为只要不超过40℃即可。总之，温度低对细胞伤害少，但操作困难，容易引起部分凝固而使细胞分布不均匀。故要求操作迅速（最好环境温度也在25-30℃）。E、宜在黑暗或光强很低的条件中培养。根据一些实验室的经验，在培养期间经常用显微镜在光下观察的反板，与一直在黑暗中增养的平板比较，其细胞群落的形成会受到一些抑制。此外，为了提高植板率，

6、还可以将一块植物组织与单细胞一起放到培养皿内的平板上，来提高植板率。具体做法是：在培养皿放几只玻璃环，环外是一般的平板增养，接种较低起始密度的单细胞。环内接入一块愈伤组织，让它起看护组织的作用，其代谢产物可以通过琼脂扩散到环外去，从而促进环外单细胞的分裂生长。判断题14、通过愈伤组织形成的植株不易产生变异。（错）16、生根培养基中必须加入较高浓度的细胞分裂素。（错）18、原生质体融合也叫体细胞杂交。（对）21．简述花药培养的程序。答：（1）材料选取：花药接种前一般需预先用醋酸洋红，I-KI溶液或浮尔根等染液进行压片镜检，以确定花粉的发育时期，并拭出花粉发育时期与花蕾或幼穗大小，

7、颜色等特征之间的相应关系。一般而言，以单核中、晚期的花药进行培养是目前培养成功的主要时期。据颜昌敬统计的13种作物，其中有11种作物适宜单核期。（2）预处理：（1）低温预处理；（2）变温处理；（3）离心预处理  ；（4）乙烯利预处理。14（3）消毒：花药培养时，材料的表面消毒通常比较方便，因为未**的花蕾中的花药为花被所包裹，本身处于无菌状态之中。花蕾或幼穗的表面消毒一般用70%酒精在表面擦拭或浸一下后，在泡和漂白粉上清液中浸10-15分钟，或用0.1%HgCl2消毒7-10min，然后用无