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《白藜芦醇在黑色素瘤小鼠体内的药动药效及pk-pd结合模型研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、华中科技大学博士学位论文白藜芦醇在黑色素瘤小鼠体内的药动药效及PK-PD结合模型研究华中科技大学同济医学院基础医学院药理学系博士学位申请人：刘心霞指导老师：陈汇教授中文摘要第一部分白藜芦醇在黑色素瘤小鼠体内的药代动力学研究目的：探索白藜芦醇（resveratrol,Res）单次及多次给药后，C57BL/6荷黑色素瘤小鼠体内，Res及其主要代谢产物葡萄糖醛酸结合物(resveratrol-glucuronide,Res-G）和硫酸结合物(resveratrol-sulfate,Res-S)的药代动力学特征，并建立相应的PK模型，为PK-PD结合模型提
2、供合适的药代动力学驱动因素PKinput。方法：1)以水杨酸为内标，建立可同时测定血浆中Res及主要代谢物Res-G和Res-S的高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）检测方法。2)建立C57BL/6小鼠皮下移植B16F10黑色素瘤模型，单次灌胃给予低、高剂量Res（50、100mg/kg）后，分别于给药前及给药后0.083、0.167、0.333、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0h经眼眶内呲静脉丛采血，用上述建立的HPLC-MS/MS方法检测Res及Res-G，Res-S的血药浓度，WinNonlin
3、软件进行Res及Res-G，Res-S的药动学（pharmacokinetics,PK）模型模拟拟合，并计算药动学参数；3)C57BL/6荷黑色素瘤小鼠灌胃给予低、高剂量Res（50、100mg/kg/d），连续给药21d，分别在第3,6,9,12,15,18,21d采样，于当天给药后0.167、1.0、2.0、4.0h经眼眶内呲静脉丛采血，检测血药浓度。参考单次给药药动学参数，结合多次给药有限采样的实测血药浓度，采用WinNonlin软件建立Res长期给药过程中PK模型，模拟拟合Res及Res-G，Res-S的药时曲线，并计算多次给药药代动力学参
4、数。结果：结果：黑色素瘤小鼠单次灌胃给予Res后，药物在体内表现出较快的吸收3华中科技大学博士学位论文和消除，代谢物Res-G的血药浓度及明显高于Res，Res-S的血药浓度与Res接近；多次给药过程中，AUC增加，清除率降低，Res及Res-G、Res-S均表现出一定程度的蓄积。结论：Res在体内吸收消除较快，并快速转化为代谢物，Res-G、Res-S是其循环过程中的主要存在形式；多次给药过程中，黑色素瘤病情进展可影响Res原型及代谢物使之蓄积。关键词：白藜芦醇，单次药代动力学，多次药代动力学，白藜芦醇葡萄糖醛酸结合物，白藜芦醇硫酸结合物第二部分
5、白藜芦醇在黑色素瘤小鼠体内的药效动力学研究目的：研究在黑色素瘤发生发展过程中及Res给药治疗过程中，肿瘤体积，Tyrosinase，COX-2,Ape/Ref-1,VEGFA及Survivin的动态变化规律，为PK-PD结合模型提供合适的药效替代指标PDendpoint。方法：1）建立C57BL/6小鼠皮下移植B16F10黑色素瘤模型，分为3组：模型对照组（0.5%CMC-Na），低、高剂量Res组（50、100mg/kg/d），连续灌胃21d，监测肿瘤体积；分别于开始给药后第3，6，9，12，15，18，21d分批处死动物，剖取肿瘤组织；2）提取
6、mRNA，普通PCR扩增后回收，构建重组质粒标准品，绘制标准曲线，采用绝对实时荧光定量RT-PCR法检测Tyrosinase，COX-2,Ape/Ref-1,VEGFA,Survivin的mRNA表达；制备组织匀浆，BCA法测总蛋白浓度，采用相应的ELISA试剂盒检测上述各指标的蛋白表达；制备酶液，通过检测催化特异性底物的反应，计算Tyrosinase和COX-2的酶活性；提取细胞核蛋白，采用DNA-bindingElisa法检测Ape/Ref-1的氧化还原活性；结果：随着时间推移，荷瘤小鼠肿瘤体积逐渐增大，Tyrosinase,COX-2及Sur
7、vivin的活性或表达逐渐升高，Ape/Ref-1先升后降,VEGFA初期无明显变化,在第9-12天开始上升；Res能够降低肿瘤生长速度，下调COX-2,Ape/Ref-1,VEGFA,Survivin4华中科技大学博士学位论文的mRNA和蛋白表达，同时抑制Tyrosinase，COX-2和Ape/Ref-1的活性，但对Tyrosinase的mRNA和蛋白表达无明显影响，上述作用呈动态变化。结论：Tyrosinase，COX-2,Ape/Ref-1,VEGFA及Survivin在黑色素瘤的发生发展过程中呈动态变化，Res可抑制小鼠黑色素瘤生长，并从
8、不同水平影响上述各指标。关键词：白藜芦醇，酪氨酸酶，环氧合酶-2，氧化还原因子1，血管内皮生长因子，生存蛋白第三部分白藜芦
