大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药谱及其产esbls的研究

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1、大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药谱及其产ESBLs的研究作者：陈云波王震查长森邹立林季敬章彭颖吕建新【摘要】目的了解临床分离的54株大肠埃希菌对氨基糖类苷类抗生素的耐药谱及产ESBLs情况，分析氨基糖苷类修饰酶AAC(3)-II的检出率及该酶的一些特征。方法采用MIC法测定临床分离的54株大肠埃希菌对7种氨基糖苷类抗生素的耐药谱，用NCCLS推荐的酶抑制剂增强纸片扩散法检测产ESBLs菌株，并通过聚合酶链反应、克隆测序和测定重组菌耐药谱对aac(3)-II基因进行研究。结果54株大肠埃希菌对阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素

2、、妥布霉素、链霉素、大观霉素和奈替米星的耐药率分别为14.8%、77.8%、59.3%、66.7%、68.5%、61.1%、22.2%；共检测出产ESBLs菌株34株，占63.0%；aac(3)-II基因在54株大肠埃希菌中检出率为88.5%；质粒转化菌产ESBLs且同时检出aac(3)-II基因。重组菌BL21(DE3)/pET26：：aac(3)-II对庆大霉素和卡那霉素有耐药性，对其余5种氨基糖苷类抗生素没有表现出耐药性。结论大肠埃希菌对庆大霉素的耐药率最高，对阿米卡星的耐药率最低；耐氨基糖苷类抗生素的大肠埃希菌与

3、其产ESBLs有相关性；重组菌BL21(DE3)/pET26：：aac(3)-II仅对庆大霉素和卡那霉素产生耐药。【关键词】大肠埃希菌；氨基糖苷类抗生素；修饰酶；超广谱β内酰胺酶；耐药性ResearchonaminoglycosideresistanceprofilesandproducingESBLsABSTRACTObjectiveToinvestigatetheaminoglycosideresistanceprofilesandproducingESBLsofclinicalEscherichiacolistra

4、insandanalyzethecharacteristicofAAC(3)-II.MethodsMICtestsof7aminoglycosidesandESBLsconfirmationtestsed54strainsofE.coliaac(3)-IIgeneplifiedbyPCRandclonedintopET26b,thenandsequenced.ActivityofAAC(3)-IIethod.ResultsTheresistantratesof54strainsofE.colitoamikacin,gen

5、tamicin,kanamycin,tobramycin,streptomycin,spectinomycin,ilmicinicinandkanamycin,butnotother5aminoglycosides.ConclusionsFifty-fourstrainsofE.colihadthehighestresistantratetogentamicinikacin.ESBLs-producingstrainsostlyinaminoglycoside-resistanceE.coli.Theaac(3)-IIg

6、eneonlymediatesresistancetogentamicinandkanamycin.KEYodifyingenzymes;Extended-spectrumbeta-lactamases;Antibioticresistance大肠埃希菌(E.coli)是条件致病菌，2002年全国细菌耐药性监测网对所属57家三级甲等医院的调查发现，其临床分离率列第一位(14.2%)［1］。目前国内对大肠埃希菌的多重耐药性已引起很大的重视，对β-内酰胺类、氨基糖苷类抗生素(aminoglycosides)的耐药机制有较多的

7、研究，但两者相关性的研究还不多。以54株从临床分离的大肠埃希菌为研究对象，测定菌株对7种氨基糖苷类抗生素的最低抑菌浓度(MIC)及检测其产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)，为临床合理有效地应用抗生素提供依据；同时克隆aac(3)-II基因到pET26b，检测重组菌BL21(DE3)/pET26：：aac(3)-II对氨基糖苷类抗生素的耐药谱，为进一步研究aac(3)-II基因奠定基础。1材料和方法1.1实验菌株及质粒收集从2005年2～8月温州医学院附属第一医院临床送检的血液、腹水、尿液等无菌体液标本分离得到的大肠埃希菌

8、，纸片法测定其对庆大霉素(gentamicin，抑菌圈直径≤12mm)、卡那霉素(kanamycin，抑菌圈直径≤13mm)和妥布霉素(tobramycin，抑菌圈直径≤12mm)任一或以上耐药菌共54株，其中已剔除重复菌株，细菌标记为erieux公司VITEK60细菌鉴定仪鉴定。质控的标准菌株为大肠埃希菌ATCC2