天然水蛭素对实验性肝纤维化大鼠肝脏结缔组织生长因子 mrna表达的影响

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1、天然水蛭素对实验性肝纤维化大鼠肝脏结缔组织生长因子mRNA表达的影响作者：贾彦牛英才张英博周丽董妙先【摘要】　　目的观察水蛭素对肝纤维化大鼠肝脏组织结缔组织生长因子（ConnectivetissuegroRNA表达的影响。方法SD大鼠60只随机分为空白对照组、模型组和水蛭素组共3组，每组20只，用40%四氯化碳（carbontetrachloride,CCl4）复制大鼠肝纤维化模型，水蛭素干预12周后处死大鼠，采用实时荧光定量PCR法检测大鼠肝组织CTGFmRNA的表达。结果模型组CTGFmRNA2-ΔΔCt值（3.59±0.52）显著高于正常对照组（1.02±0.23）(P<0.05

2、)，表明模型组CTGFmRNA表达上调。与模型组比较，水蛭素组CTGFmRNA2-ΔΔCt值（1.83±0.34）显著降低（P<0.05），表明CTGFmRNA表达下调。结论水蛭素可能通过下调CTGFmRNA的表达，抑制肝脏细胞外基质异常增生发挥抗肝纤维化作用。【关键词】水蛭素；肝纤维化；结缔组织生长因子；实时荧光定量PCR　　Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofhirudinonCTGFmRNAexpressioninratliverinhepaticfibrogenesisinducedbycarbontetrachloride(CCl4).

3、MethodsStudiesaleSprague-Dalydividedinto3groupsedasblankcontrolsgroup,modelgroup,andhirudingroup.Ahepaticfibrosismodelonratsalsalineodelgrouprats.After12RNAexpressioninhepatictissueequantitativereversetranscription-PCR.ResultsTheCTGFmRNAexpressionodelgroups,inRNA2-ΔΔCtvalueRNAexpressioninhirudingro

4、up(1.83±0.34)odelgroup(P<0.05).ConclusionHirudinmaydoRNAandInhibittheabnormalhyperplasiaofhepaticextracellularmatrix,soithasthefunctionofantihepaticfibrosis.　　Keyequantitativereversetranscription-PCR　　肝纤维化是大多数慢性肝病向肝硬化发展的共同病理过程，成因相当复杂，阻断肝纤维化的继续发展，是预防肝硬化的关键［1］。肝纤维化的特征是肝细胞增殖和细胞外基质聚集，并需转化生长因子-β1（TGF

5、-β1）参与，CTGF是TGF-β1的下游效应介质，具有介导TGF-β1促细胞外基质沉积的作用，阻断CTGF可抑制TGF-β介导的细胞外基质（Extracellularmatrix,ECM）产生［2］。多数中医医家认为肝血瘀阻是肝纤维化基本病机，因此用药以活血化瘀为主。水蛭是经典的破血逐瘀类中药。作者利用SYBRGreenⅠ实时定量RT-PCR技术，建立大鼠肝组织CTGF基因相对表达量的检测方法，观察了水蛭素干预对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏组织中的CTGF基因的影响。　　1材料与仪器　　1.1药物水蛭素的提取［3］：先将宽体金线蛭干制品粉碎，然后加入10倍体积的80%预冷丙酮，4℃搅拌1

6、0min，再加入氯化钠和三氯乙酸，搅拌30min，然后离心，弃上清液，沉淀中加入其体积1/3的80%冷丙酮，抽提2次，离心，收集上清液，合并两次抽提液加入2倍体积的冷丙酮，静置2h，再离心，弃上清液，收集沉淀，干燥得水蛭素粗品。四氯化碳（CCl4分析纯）：北京北化精细化学品有限责任公司。　　1.2动物及分组选用健康雄性清洁级SD大鼠60只，体重（200±10）g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号SCXK（京）2002-0003。经适应性饲养1周，随机分为空白对照组、模型对照组和水蛭素组共3组。　　1.3试剂和仪器SYBRExScriptTMRT-PCRkit（Perfec

7、tRealTime）为TAKARA公司产品，2700型PCRSystem扩增仪为AppliedBiosystems公司产品，UV-2550型紫外分光光度计为日本岛津产品，ABI7300荧光定量PCR仪为美国ABI公司产品。　　2方法　　2.1肝纤维化模型的建立［4］和药物干预大鼠皮下注射体积比为40%的CCl4和橄榄油混合液0.2ml/100g，每周2次，连续12周。正常组用等量生理盐水皮下注射，水蛭素组在造