血管内皮生长因子在先兆子痫大鼠肾损伤中的作用

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1、血管内皮生长因子在先兆子痫大鼠肾损伤中的作用【摘要】目的研究血管内皮生长因子（VEGF）在先兆子痫大鼠肾损伤中的作用。方法采用一氧化氮合酶抑制剂复制大鼠先兆子痫模型，通过双抗酶联免疫吸附法检测血浆及尿液中VEGF含量，应用原位杂交法测定肾小球VEGFmRNA转录水平，利用免疫组化法检测肾小球VEGF蛋白表达情况。结果在先兆子痫大鼠中，尿液中VEGF含量（以尿VEGF/尿肌酐表示）升高且与肾脏局部VEGF的表达强度呈正相关，肾小球局部VEGFmRNA和VEGF蛋白表达均增强，且表达的强度与24h尿蛋白排泄量呈正相关。结论尿液VEGF可能来源于肾脏局部的分

2、泌，肾小球VEGF可能参与了先兆子痫中大量蛋白尿的产生。【关键词】血管内皮生长因子；先兆子痫；蛋白尿【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofvascularendothelialgropsia.MethodsAratmodelofpreeclampsiaaandurinaryVEGFinedusingasandeimmunoassay.ThelevelofVEGFmRNAinglomerulieasuredbyinsituhybridization.TheexpressionofVEGFprotEining

3、lomerulimunohistochemistrymethod.ResultsInratspsia，urinaryVEGFlevels(expressedasVEGF/creatinineratio)eruli，thelevelofVEGFmRNAandtheexpressionofVEGFeruliand24hurinaryprotEInexcretion.ConclusionCorrectedurinaryVEGFlevelscanstandfortheexpressionofVEGFinglomeruli.VEGFinglomerulimigh

4、tbeinvolvedinthemechanismofproteinuriainpreeclampsia.【Keypsia；proteinuria先兆子痫是引起孕产妇及围生儿死亡的重要原因，肾脏损伤所致的大量蛋白尿为其主要的临床表现。引起肾小球滤过膜通透性增高的原因目前不详。血管内皮生长因子（vascularendothelialgroa公司），VEGFElisa试剂盒（北京中山生物有限公司），地高辛标记的VEGFmRNA探针（德国Biognostik公司），VEGF多克隆抗体（SantaCruz公司），SABC试剂盒（武汉博士德生物制品公司），大鼠尾

5、动脉袖带式血压计（由同济医学院心血管研究中心提供），透射电镜（由同济医学院超微病理学教研室提供），计算机病理图像分析仪（由同济医学院清屏影像公司提供）。1.2动物模型复制与分组取200～250g普通级E处理组。从妊娠第18d开始对A组和B组大鼠分别皮下注射L-NAME和蒸馏水250mg/（kg·d），持续4d后于妊娠第22d时处死。C组大鼠于皮下注射L-NAME250mg/（kg·d），持续4d后处死。1.324h尿蛋白排泄量的测定用标准代谢笼分别与注射前和注射第2、4d收集各组大鼠24h尿液，采用考马斯亮蓝结合法测定24h尿蛋白排泄量。1.4收缩期血

6、压的测定A组和C组大鼠于L-NAME注射前及L-NAME注射第2、3、4d测量尾动脉收缩压。具体方法是将大鼠置于预热箱内预热至38℃～40℃，待其安静后用大鼠尾动脉血压仪在5min内连续测量3次收缩期血压，取平均值。1.5血浆及尿液标本的采集与检测在注射第4天时经眼静脉窦采集各组大鼠静脉血2ml，置于经肝素抗凝的玻璃管，3000r/min离心10min后取上清液，置于-70℃冰箱保存待检。大鼠处死后经膀胱穿刺收集各组大鼠尿液，3000r/min离心10min取上清3ml存放于-70℃冰箱保存待检。采用双抗酶联免疫吸附法（ELISA），通过绘制标准曲线求

7、出标本VEGF的浓度，为了纠正尿液浓度不同的影响，尿液VEGF含量以尿VEGF/尿肌酐（ng/mmolCr）来表达。1.6原位杂交法大鼠处死后，取一侧肾组织将其置于4%多聚甲醛液1～2h、脱水、透明、浸蜡、包埋、连续切片后，具体操作步骤按VEGFmRNA原位杂交试剂盒说明书进行。实验设不加探针的阴性对照。显微镜下胞浆呈黄色颗粒状为阳性。1.7免疫组织化学法VEGF蛋白用免疫组织化学法检测，具体操作步骤见试剂盒说明书。实验均设不加一抗的阴性对照。显微镜下胞浆呈棕黄色颗粒状者为阳性，蛋白表达强弱用吸光度（absorbance，A）表示。每张切片随机选取5个

8、肾小球，用免疫组化分析软件（HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告分析系统）计算VEGF