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1、SSR分子标记技术及其在构建玉米DNA指纹库上的应用论文.freelplesequencerepeat(SSR)markersonthebasisofPCRasatechnologyofdetectionDNApolymorphismhavebeeneresearchinsomefields.Inthepaper,thetheories,types,functionsandsourcesofprimersbySSRmarkeraizeDNAfingerprintingpoolconstructi
2、onbySSRaizeDNAfingerprintingpooloncultivaridentification,cultivarprotection,cultivardetectionetalaizevarietiesresearch.Keyolecularmarker;maize;DNAfingerprintingdatabase;application玉米是一种重要的饲用、粮用和工业加工作物,在国民经济中占有重要的地位。玉米育种方法的改进对农业发展具有重要意义。长期以来,育种家们大多数是借
3、助易于鉴别的形态学和同工酶等遗传标记来辅助育种,并取得了很大成功。但这类标记的最大不足之处在于其数量有限,.freelplesequencerepeat,SSR),又称为微卫星DNA(MicrosatelliteDNA)。微卫星通常是指以2~4个核苷酸为单位多次串联重复的DNA序列,也有少数以1~6个核苷酸为串联重复单位。微卫星在基因组中的分布是随机的,它可以存在于内含子、外显子及染色体的其他任何区域。在不同植物中,微卫星重复单位的碱基组成及拷贝数随物种的不同而有所差异,但人们发现微卫星两端的序
4、列是保守的。因此,可以设计出与微卫星两端保守序列互补的引物,通过PCR扩增重复序列本身并通过凝胶电泳检测其多态性。SSR序列多态性的出现是由于同一物种中不同基因型的寡核苷酸重复次数不同以及重复序列在染色体复制时的滑动或染色单体的不等交换造成的。因此,微卫星可用作分子标记。由于玉米中存在转座子,微卫星的多态性表现得极为丰富,所以,通过特异性引物进行PCR扩增反应、琼脂糖凝胶电泳(或聚丙烯酰胺凝胶电泳)、放射自显影(或银染)和GeneScan技术等,就可以检测到在简单重复序列重复单位数不同的DNA区
5、域的多态性,这也是SSR技术较其他几种分子标记技术更适合于玉米研究的原因之一。SSR技术推动了玉米研究的发展。1.2SSR标记的类型按照重复单位的碱基数可将微卫星分为一至六核苷酸重复类型,其中二核苷酸重复有4种类型:(AT)n/(TA)n、(AG)n/(TC)n、(AC)n/(GT)n、(GC)n/(CG)n;三核苷酸重复有10种类型:(AAT)n/(TAT)n、(AAG)n/(TCT)n、(AAC)n/(TGT)n、(ATG)n/(TCA)n、(AGT)n/(TAC)n、(AGG)n/(TCC
6、)n、(AGC)n/(TGC)n、(ACG)n/(TCG)n、(ACC)n/(TGG)n、(GGC)n/(CGC)n;四核苷酸重复类型有32种(Jurke,1995)。所有类型的微卫星中以单核苷酸重复和二核苷酸重复的微卫星在基因组中出现的频率最高。同一重复类型中不同的碱基重复多态性也不一致。另外,.北京:中国农业科技出版社,2005.2王凤格,赵久然,郭景伦,等.中国玉米新品种标准DNA指纹库构建研究的几点思考J.植物学通报,2005(1):121-128.3郭景伦,赵久然,尉德铭,等.玉米单粒
7、种子DNA提取新方法J.北京农业科学,1997(2):2-3.4郭景伦,赵久然,王凤格.适用于SSR分子标记的玉米单粒种子DNA快速提取新方法J.玉米科学,2005(2):16-17,25.5赵久然,郭景伦,郭强,等.应用RAPD分子标记技术对我国骨干玉米自交系进行类群划分J.华北农学报,1999(1):32-37.6GRAHAMR,MICOLJ,MICOLJ,SPOONERDM,RODRIGUEZF,etal.Selectionofhighlyinformativeanduser-friend
8、lymicrosatellites(SSRs)forgenotypingofcultivatedpotatoJ.TheorApplGe,2004(108):881-890.14ZHANGLS,CLERCVL,LIS,etal.EstablishmentofaneffectivesetofsimplesequencerepeatmarkersforsunfloentJ.CanadianJournalofBotany,2005(1):66-72.15MACAULAYM,RAMSAYL,POative
