五氯酚钠急性染毒对小鼠免疫细胞损伤影响

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1、五氯酚钠急性染毒对小鼠免疫细胞损伤影响【摘要】目的观察五氯酚钠对小鼠细胞免疫、体液免疫和巨噬细胞功能的毒性作用。方法将五氯酚钠以25，50和100mg/kg经灌胃方式一次给予小鼠，然后观察给药后3，24和48h小鼠各项免疫功能的变化，采用T淋巴细胞增殖法测定细胞免疫功能，采用B淋巴细胞增殖法测定体液免疫功能，采用巨噬细胞吞噬能力和分泌NO的能力来测定巨噬细胞功能。结果100mg/kg五氯酚钠染毒后3h，小鼠的脾脏和胸腺相对重量较对照组降低，脾脏B淋巴细胞的增殖能力受到抑制，腹腔巨噬细胞的吞噬功能和NO生成能力受到

2、抑制。25和50mg/kg五氯酚钠在染毒后24h依然对脾细胞中B淋巴细胞增殖能力产生抑制作用。这种抑制效应到48h时完全消失。结论五氯酚钠一次染毒在25～100mg/kg剂量范围内对小鼠体液免疫和细胞免疫功能产生抑制作用，100mg/kg对巨噬细胞功能产生抑制作用，对细胞免疫功能未见影响。【关键词】五氯酚钠　五氯酚钠(又称灭钉螺药，PCP-Na)是在世界范围被广泛使用的一种农药，由于大面积推广，引起了一定的环境污染，对人类健康造成影响〔1，2〕。Lang等〔3〕利用人淋巴细胞在体外接触五氯酚研究中发现，无论工业品

3、还是分析纯五氯酚在10～40μmol/L浓度下与淋巴细胞共同孵育8d，对于IgG和IgM抗体的产生量均有明显的抑制作用。Daniel等〔4〕在人群研究中发现，血液中五氯酚浓度的升高能够导致T细胞功能障碍。体外研究表明，5mg/L以上的五氯酚能够抑制克鲤鱼和港湾鱼的巨噬细胞和嗜酸性细胞杀菌活性〔5〕。目前的研究基本上以五氯酚为主，尽管五氯酚钠与五氯酚的代谢途径类似，但其毒性表现是否一致仍需要进一步探索。本研究采用五氯酚钠一次性染毒小鼠，观察染毒后不同时间小鼠免疫功能的变化。　　1材料与方法　　11实验动物清洁级I

4、CR雌性小鼠150只(北京大学医学部实验运动科学部)；体重20～24g，雌性，动物合格证号：SCXK(京)2002-0001。动物饲养室温，20～25℃，动物进食标准基础饲料，自由饮用自来水。　　12主要试剂五氯酚钠(国产，分析纯，sodiumpentachlorophenate)；四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)，刀豆蛋白A(ConA)，脂多糖(LPS，美国Sigma公司)；RPMI1640完全培养液，Hanks液等。　　13动物染毒和处理将小鼠随机分为4组，每组5只。分别为对照组(蒸馏水)，25，50和100m

5、g/kg组。将五氯酚钠一次性以灌胃方式染毒，分别在小鼠染毒后3，24和48h，处死小鼠，取出脏器，剔除结缔组织和脂肪，吸净残留血液，称重，进行各项指标测定。　　14T淋巴细胞增殖处死小鼠，无菌取脾，制备成单个细胞悬液，然后将细胞数调整至2×106个/ml。将每份细胞悬液分2孔加入24孔板，每孔1ml，其中一孔作为对照，另一孔加入20μlConA(400μg/ml)做为刺激孔，将细胞放入5%CO2，37℃培养箱中孵育68h，取出加入MTT(5mg/kg)50μl/孔，继续培养4h，弃上清，每孔加入1ml酸性异丙醇

6、，吹打均匀，在酶标仪上570nm波长下比色。　　15淋巴细胞增殖方法同T淋巴细胞增值，所用刺激物为25μlLPS(400μg/ml)。　　16巨噬细胞吞噬功能处死小鼠后将RPMI1640完全培养液2ml，注入小鼠腹腔，收集灌洗的液体，调整细胞数至５×１０４个/ml，将细胞悬液加入96孔培养板，每孔100μl。将巨噬细胞置入5%CO2，37℃培养箱中孵育2h，取出后弃上清，加入用RPMI1640完全培养液稀释的中性红(50μg/ml)100μl，再置于5%CO2，37℃培养箱中孵育30min，取出96孔板，弃上

7、清，每孔加入150μl冲洗液，冲洗后弃去。再加入100μl溶解液，在721分光光度计上540nm波长下比色。　　17巨噬细胞产生NO测定巨细胞收集同巨噬细胞吞噬功能测定，收集细胞后，将细胞调整至１×１０６个/ml，加入24孔培养板，每孔1ml，放入5%CO2，37℃培养箱中孵育2h，取出后弃上清，每孔重新加入1mlRPMI1640完全培养液，同时加入LPS(终浓度5μg/ml)，继续培养24h，收集培养上清，用1ml培养上清与1mlGrEiss试剂混匀，于540nm波长下比色。同时用亚硝酸钠配制标准曲线，计算培

8、养上清中亚硝酸盐氮含量。　　18统计分析采用SPSS统计软件进行单因素方差分析。　　2结果　　21一般状况　　211不同剂量的五氯酚钠一次染毒3h对小鼠器官变化的影响(表1)一次染毒3h后，100mg/kg五氯酚钠剂量组小鼠的脾脏和胸腺相对重量明显降低，与对照组比较差异有统计学意义，而肝脏和肾脏相对重量与对照组比较差异无统计学意义。50和25mg/kg五氯酚钠剂量