麝香配伍冰片对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑含水量及血脑屏障通透性的影响论文

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时间:2018-11-21

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1、麝香配伍冰片对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑含水量及血脑屏障通透性的影响论文.freelg·kg-1·d-1)、冰片组(剂量为3mg·kg-1·d-1)、麝香配伍冰片组、尼莫地平组(剂量为12mg·kg-1·d-1);采用颈内动脉线栓法复制大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,干湿质量法观察脑含水量的变化,通过收集透出脑血管外的伊文思蓝(Evansblue,EB)来示踪BBB的变化。【结果】脑缺血2h再灌注24h,模型组较假手术组脑含水量及脑皮质EB含量显著性增加(P<0.01),血脑屏障遭到破坏;麝香配伍冰片组脑含

2、水量较模型组显著性降低(P<0.05),而且麝香配伍冰片组及冰片组脑皮质EB含量较模型组显著性降低(P<0.01)。【结论】麝香配伍冰片可有效降低脑缺血再灌注后脑含水量及血脑屏障的通透性.freelg、冰片0.3mg);尼莫地平由德国拜耳公司生产(批号:103728),用体积分数为1%吐温配成悬浊液(每毫升含尼莫地平1.2mg)。1.3仪器及试剂伊文思蓝由Sigma公司生产;二甲基甲酰胺由Sigma公司生产;FX42型电热恒温干燥箱由Shellab公司生产;BT224S电子天平由Sartorius公

3、司生产;U2001型紫外分光光度计由Hitachi公司生产。1.4动物分组与给药大鼠随机分为6组,即假手术组、模型组、麝香组(剂量为1mg·kg-1·d-1)、冰片组(剂量为3mg·kg-1·d-1)、麝香配伍冰片组、尼莫地平组(剂量为12mg·kg-1·d-1),每组5只。各组大鼠用药量按体表面积公式计算,药物灌胃量为10mL·kg-1·d-1,假手术组与模型组给予体积分数1%吐温溶液10mL·kg-1·d-1灌胃。各组在造模前12h给药1次,再于缺血前30min给药1次,缺血后12h与24h各给药

4、1次(共给药4次)。1.5模型制备参照Longa等[5]的线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型。术前禁食12h,自由饮水;实验前腹腔注射100g/L水合氯醛(0.35g/kg)麻醉,取大鼠腹侧颈部正中手术切口,分离右侧颈总动脉、颈外动脉,颈内动脉和翼腭动脉;结扎翼腭动脉,然后在距颈总动脉分叉1cm处结扎颈外动脉,并于颈外动脉远心端用电凝器灼断;动脉夹夹闭左颈总动脉,在颈外动脉距结扎处近心端约0.5cm处剪一切口,将尼龙线栓经右侧颈外动脉主干切口缓慢向颈内动脉入颅方向推进,以颈总动脉分叉处为标记,推进18~2

5、0mm感到轻微阻力时,即阻断大脑中动脉;阻断2h后,拨出尼龙线,扎紧动脉残端,缝合皮下组织和皮肤,完成缺血再灌注损伤模型。假手术组除不插线外,全过程同其他各组。1.6脑含水量测定采用干湿质量法测定缺血侧脑含水量。脑缺血再灌注24h后处死大鼠,快速断头取脑,滤纸擦去表面水分,取缺血侧半边大脑,置天平内精密称取湿质量,然后置110℃电烤箱24h,再迅速测干质量。计算脑含水量:p含水,脑/%=(m湿脑-m干脑)/m湿脑×100%。1.7伊文思蓝标准曲线制备将二甲基酰胺配制的伊文思蓝母液按倍比稀释法配制成不同

6、浓度(50~1000ng/mL),在分光光度计上测定其吸光度,测定波长为620nm,以浓度(ρ)为横坐标,以吸光度(D)为纵坐标,求得回归方程Y=0.0423X+0.0447,r=0.999。1.8伊文思蓝含量测定BBB的通透性是按照Uyama等[6]的方法加以改进,通过渗出血管外的EB来评价的。在再灌注23h时用100g/L水合氯醛麻醉大鼠(350mg/kg),经股静脉注入20g/LEB生理盐水溶液(3mL/kg)1h后,开胸通过左心室灌注生理盐水,直到右心耳流出的液体无色为止,断头取脑,滤纸吸干大

7、脑表面水分,取缺血侧大脑皮层,电子天平精确称取其湿质量后,放入试管,分别加入4mL二甲基甲酰胺,加盖后于50℃的水浴箱孵育48h,再离心15min(3000r/min),取上清液采用分光光度计测定其吸光度,测定波长定为620nm。根据EB溶液标准曲线,计算EB的含量。1.9统计处理采用SPSS11.0软件进行统计处理。2结果表1结果表明,与假手术组比较,模型组缺血侧脑含水量及脑皮质EB含量增加(均P<0.01);与模型组比较,麝香配伍冰片组缺血侧脑含水量降低(P<0.05),麝香配伍冰片组及冰片组缺血

8、侧脑皮质EB含量显著性降低(P<0.01)。表1各组脑组织含水量及EB含量的比较统计方法:方差分析;①:P<0.01,与假手术组比较(vstheshamoperationgroup);②:P<0.05,③:P<0.01,与模型组比较(vsthemodelgroup)3讨论BBB受损是缺血性脑水肿重要的病理环节。缺血早期为细胞毒性水肿,是构成细胞内液体聚集的主要原因。缺血后数分钟,缺血区毛细血管内皮细胞及周围的胶质细胞即开始肿胀,持续肿胀引起BBB破坏,

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