不同采收期头花蓼药材指纹图谱相似度评价论文

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1、不同采收期头花蓼药材指纹图谱相似度评价论文王祥培，吴红梅,王祥森，刘霞【摘要】目的对不同采收期头花蓼药材进行指纹图谱相似度评价,探索最佳采收期。方法用RP-HPLC(DAD)法，梯度洗脱，测定不同采收期头花蓼的指纹图谱，并作相似度比较分析。结果不同采收期头花蓼的指纹图谱有明显差异。结论应注意不同采收季节对头花蓼药材的质量影响。【关键词】头花蓼药材;HPLC指纹图谱;相似度头花蓼为蓼科植物头花蓼PolygonumcapitatumBuch.-Han.exD.Don的干燥全草或地上部分，具有清热利湿，解毒止痛.freelcapitatumBuch.

2、-Ham.exD.Don的干燥全草。具体见表1。没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0638-9501)，槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：081-90003)，槲皮苷对照品(自制，纯度﹥98%);乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸镏水。1.2仪器Agilent1100型高效液相色谱仪(自动进样品)，二极管阵列检测器(DAD);《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》(国家药典委员会)。2方法与结果2.1色谱条件采用依利特HypersilODS色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)，乙腈-0.4%磷酸二元梯度洗脱，体

3、积流量：0.8ml/min，检测波长：310nm，柱温25℃。2.2流动相条件60～5min：乙腈0%～5%，0.4%磷酸100%～95%;5～55min：乙腈5%～25%，0.4%磷酸95%～75%;55～70min：25%～30%，0.4%磷酸75%～70%;70～80min：乙腈0%，0.4%磷酸100%;80～85min：乙腈0%，0.4%磷酸100%。2.3供试品溶液的制备6取头花蓼细粉(3号筛)2g，精密称定，置圆底烧瓶中，分别加100ml80%乙醇，置水浴中加热回流2h,滤过，残渣加100ml80%乙醇回流提取1h，滤过，合并滤液

4、。滤液置蒸发皿中挥干，残渣加80%乙醇定容置10ml容量瓶中。用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。2.4对照品溶液的制备精密称取没食子酸、槲皮素和槲皮苷对照品适量，加50%甲醇溶解分别制成0.0315，0.0281和0.0613mg/ml的溶液,即得。2.5指纹图谱方法学考察62.5.1精密度实验取同一份供试品溶液，重复进样6次，测得各共有色谱峰相对留时间及相对峰面积的RSD均低于3%，表明精密度良好。2.5.2稳定性实验取同一份供试品溶液，分别在0，2，6，12，20，30h进行检测，测得各共有色谱峰相对保留时间及相对峰面积的RS

5、D均低于3%，表明样品溶液在30h内稳定。2.5.3重复性实验取同一采收期的供试品5份，精密称量，按“2.3”项下制备供试品溶液，分别进样，测得各共有色谱峰相对留时间及相对峰面积的RSD均低于3%，表明重复性良好。2.6指纹图谱建立精密吸取对照品与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，按选定的色谱条件，进行检测。同一实验条件下，测定所有供试品HPLC色谱图。根据不同采收时间供试品测定结果所给出的峰数、峰值(积分值)和峰位(相对保留时间)等相关参数进行分析、比较，制定优化的指纹图谱，见图1。图1不同采收期头花蓼药材指纹图谱2.7指纹图谱分析6

6、2.7.1共有指纹峰标定比较不同采收期头花蓼供试品溶液给出的相关参数，其中13个峰是各批供试品共有，因此确定这13个峰为其共有指纹峰，其中槲皮苷峰较没食子酸峰及槲皮素峰大，选作为参照峰。2.7.2头花蓼指纹图谱相似度评价将15个不同采收期头花蓼样品测定数据导入中药指纹图谱相似度计算软件，经选峰，设定匹配模板，将峰自动匹配，然后设定标准模板，进行谱峰差异性评价和整体相似性评价。通过中药指纹图谱相似度计算软件得出头花蓼HPLC指纹图谱共有模式，与共有模式比较，15批次不同采收期头花蓼药材的相似度结果见表1。2.8头花蓼HPLC指纹图谱相似度的分类研

7、究采用SPSS10.0统计软件对15个样品的指纹图谱相似度数据进行系统聚类分析。结果见图2。从聚类分析结果可以看出，系统将15个样品分为2大组，2，3，4，7，8，9，10，11，12，13，14为一组，其中4，11，3，12，13为一小组，2，7，8，9，10，14为另一小组，1，5，6，15为一组，说明不同采收期头花蓼药材分为2大类，其中以1～4月采收的为一大类，5～12月的为一大类，但9～11月为一小类，5～8月为一小类。表1不同采收期头花蓼药材相似度结果编号产地采收时间相似度1西藏墨脱县墨脱镇2005030.3512西藏墨脱县墨脱镇2

8、005080.8973西藏墨脱县墨脱镇2005090.9634西藏墨脱县墨脱镇2005100.9545西藏墨脱县墨脱镇2007030.3716