不同采收期头花蓼药材指纹图谱相似度评价

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1、不同采收期头花蓼药材指纹图谱相似度评价【关键词】头花蓼药材;HPLC指纹图谱;相似度　头花蓼为蓼科植物头花蓼PolygonumcapitatumBuch.-Han.exD.Don的干燥全草或地上部分，具有清热利湿，解毒止痛，活血散瘀以及利尿通淋之功效，主治泌尿系统感染、血尿、湿疹、肾盂肾炎等症[1]。目前测定不同产地、不同采收期头花蓼药材中化学成分的含量已有研究报道[2～5]，但头花蓼化学成分复杂，并且随着采收期的不同存在差异。因此，为了更全面评价头花蓼药材质量和控制质量的稳定性，本文对不同采收期共15批头花蓼药材进行了高效液相指纹图谱研究，并采用国家药典委员会推荐使用的“中药色谱指纹图谱相

2、似度评价软件(2004A)”对不同采收期头花蓼药材的指纹图谱进行相似度评价,并以相似度数据进行系统聚类分析，以期为头花蓼最佳采收期的确定提供参考。　　1材料与仪器　　1.1材料采自西藏墨脱县墨脱镇，共15批，经贵阳中医学院王祥培副教授鉴定为蓼科植物头花蓼PolygonumcapitatumBuch.-Ham.exD.Don的干燥全草。具体见表1。没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0638-9501)，槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：081-90003)，槲皮苷对照品(自制，纯度﹥98%);乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸镏水。　　1.2仪器Agilent11

3、00型高效液相色谱仪(自动进样品)，二极管阵列检测器(DAD);《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》(国家药典委员会)。　　2方法与结果　　2.1色谱条件采用依利特HypersilODS色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)，乙腈-0.4%磷酸二元梯度洗脱，体积流量：0.8ml/min，检测波长：310nm，柱温25℃。　　2.2流动相条件[6]0～5min：乙腈0%～5%，0.4%磷酸100%～95%;5～55min：乙腈5%～25%，0.4%磷酸95%～75%;55～70min：25%～30%，0.4%磷酸75%～70%;70～80min：乙腈0%，0.4%磷酸100%;80～85m

4、in：乙腈0%，0.4%磷酸100%。　　2.3供试品溶液的制备[6]取头花蓼细粉(3号筛)2g，精密称定，置圆底烧瓶中，分别加100ml80%乙醇，置水浴中加热回流2h,滤过，残渣加100ml80%乙醇回流提取1h，滤过，合并滤液。滤液置蒸发皿中挥干，残渣加80%乙醇定容置10ml容量瓶中。用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。　　2.4对照品溶液的制备精密称取没食子酸、槲皮素和槲皮苷对照品适量，加50%甲醇溶解分别制成0.0315，0.0281和0.0613mg/ml的溶液,即得。　　2.5指纹图谱方法学考察[6]　　2.5.1精密度实验取同一份供试品溶液，重复进样6次，测得各

5、共有色谱峰相对留时间及相对峰面积的RSD均低于3%，表明精密度良好。　　2.5.2稳定性实验取同一份供试品溶液，分别在0，2，6，12，20，30h进行检测，测得各共有色谱峰相对保留时间及相对峰面积的RSD均低于3%，表明样品溶液在30h内稳定。　　2.5.3重复性实验取同一采收期的供试品5份，精密称量，按“2.3”项下制备供试品溶液，分别进样，测得各共有色谱峰相对留时间及相对峰面积的RSD均低于3%，表明重复性良好。　　2.6指纹图谱建立精密吸取对照品与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，按选定的色谱条件，进行检测。同一实验条件下，测定所有供试品HPLC色谱图。根据不同采收时间供试品

6、测定结果所给出的峰数、峰值(积分值)和峰位(相对保留时间)等相关参数进行分析、比较，制定优化的指纹图谱，见图1。图1不同采收期头花蓼药材指纹图谱　　2.8头花蓼HPLC指纹图谱相似度的分类研究采用SPSS10.0统计软件对15个样品的指纹图谱相似度数据进行系统聚类分析。结果见图2。从聚类分析结果可以看出，系统将15个样品分为2大组，2，3，4，7，8，9，10，11，12，13，14为一组，其中4，11，3，12，13为一小组，2，7，8，9，10，14为另一小组，1，5，6，15为一组，说明不同采收期头花蓼药材分为2大类，其中以1～4月采收的为一大类，5～12月的为一大类，但9～11月为一

7、小类，5～8月为一小类。表1不同采收期头花蓼药材相似度结果编号产地采收时间相似度1西藏墨脱县墨脱镇2005030.3512西藏墨脱县墨脱镇2005080.8973西藏墨脱县墨脱镇2005090.9634西藏墨脱县墨脱镇2005100.9545西藏墨脱县墨脱镇2007030.3716西藏墨脱县墨脱镇2007040.4657西藏墨脱县墨脱镇2007050.8248西藏墨脱县墨脱镇2007060.8