培养基和外源激素对‘章姬’草莓茎尖培养的影响研究

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1、培养基和外源激素对‘章姬’草莓茎尖培养的影响研究金真，王康丽，梁佳惠，梁树乐（中国农业大学（烟台），山东烟台264670）摘要：为获得高效的适合‘章姬’草莓茎尖培养的技术方案，试验通过不同培养基和外源激素对‘章姬’草莓茎尖培养的研究，建立其组培快繁体系，结果表明：在不同的处理中，最适宜的培养基和培养方式如下：（1）剥取的茎尖越大，萌发率越高。（2）在改良S+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L，增殖系数为3.8。（4）生根培养基以1/2MS+蔗糖30g/L为宜。采用各项最适的方案进行‘章姬’草莓的培养，可以达到优质高效的目的。

2、.jyqkail：[email protected]。通讯：梁树乐，男，1971年出生，副教授，博士，研究方向：植物组织培养及观赏园艺。通信264670山东省烟台市莱山区滨海中路2006号中国农业大学烟台校区，E-mail：[email protected]。收稿日期：2014-06-30，修回日期：2014-11-17。0引言草莓是蔷薇科(Rosoideae)草莓属(FragariaL.)多年生草本植物，果实酸甜可口，营养丰富，是经济价值较高的天然高档食品，市场需求量极大，中国已成为栽培草莓最多的国家之一[1]。草莓是靠匍匐茎进行

3、无性繁殖的作物，经过几代繁殖之后，容易感染多种病毒而患病。患病的草莓生长缓慢、叶片皱缩、果实小而畸形、品质变差，并且病情逐年加重[2]。在国内已造成损失的草莓病毒主要有草莓斑驳病毒(SMoV)、草莓轻型黄边病毒(SMYEV)、草莓镶脉病毒(SVBV)、草莓皱缩病毒(SCrV)等4种。草莓植株一旦感染病毒，通过常规的药剂很难进行防治，这极大地制约了草莓产业的发展。由于国内对草莓病毒病的研究起步较晚，关于草莓病毒病方面一些研究内容仍显不足。目前草莓无病毒苗的培育方法，主要有热处理法、花药培养法和茎尖组织培养法等。其中茎尖培养不仅可以有效脱除病毒，而且可以快

4、速繁殖、工厂化培育草莓苗，对草莓新品种的推广起重要作用[3]。近几年来这一领域的研究已经有较多报道，也建立了一些重要草莓品种的生产技术体系[4]。不过，在草莓无病毒苗工厂化生产过程中，依然存在着增殖速度慢、培养进程长等缺陷[5]。为了取得较好的脱毒效果，在保证成活的前提下尽量切取较小的茎尖生长点，生长点太小也增加培养的难度，所以微茎尖的启动培养是茎尖脱毒培养的关键环节，文献上也多有报道，但方法不一，培养基的外源激素的种类及浓度差异较大[6-9]。此外，微环境的控制对茎尖的培育也有很大的影响，Kozai等[10]研究表明，改变组培微环境使其更接近自然条件

5、，有利于移栽的试管苗加速驯化。‘章姬’草莓在国内栽培面积大，据中国园艺协会草莓分会的统计显示，2011年‘章姬’在中国的栽培面积超过4300hm2，位列主栽品种第7位[11]。缩短周期从脱毒苗获取的数量而言能达到成倍的增加，因此，探究草莓脱毒技术对草莓产业的发展具有重大意义。试验以茎尖培养法为基础，通过探究不同培养基及激素组合，以期得到高效的适合‘章姬’草莓茎尖培养的技术方案。1材料与方法供试材料采自中国农业大学（烟台）学校基地，选择草莓品种‘章姬’6—9月萌发的草莓匍匐茎作为试验材料，此阶段匍匐茎要求生长充实，小叶尚未展开，剪取4~5cm长的匍匐茎顶

6、部。1.1材料的灭菌消毒先用洗洁精洗刷草莓匍匐茎表面污物及绒毛，再用流水冲洗30min~1h。在超净操作台上，将冲洗后的材料留匍匐茎2~3cm长，先后用75%酒精消毒30s、用0.1%的升汞溶液消毒6~7min，并分别用无菌水冲洗3~5次。1.2茎尖的剥离与培养将消毒后的草莓匍匐茎用镊子夹到经过高压灭菌的盛有滤纸的培养皿中，置于双筒解剖镜下，剥离幼叶，切取不同大小的茎尖，保留1~2个叶原基以提高茎尖的成活率。将切取后的茎尖立即置于茎尖启动培养基上，蔗糖30g/L，经121℃压力灭菌15min后置于温度25℃，光照1500~2000lx、日照时数16h的

7、培养条件下进行启动培养。试验采用6组培养基，按GA、IBA、6-BA、NAA、IAA等激素进行不同浓度的配比，维持培养基pH5.8，并附加有蔗糖30~40g/L，琼脂6~7.5g/L。培养基的组成分别如下：①MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L+GA0.5mg/L+蔗糖30g/L；②MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L；③MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L；④MS+6-BA1.0mg/L+GA0.5mg/L+蔗糖30g/L；⑤改良S培养基+蔗糖30g/L。1.3增殖与生根培

8、养切取无根植株转入以MS为基本培养基，增加不同生长素和细胞分裂素浓度，pH5.8的培养基中进行