脂肪源间充质干细胞治疗agvhd后t细胞亚群的变化

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1、脂肪源间充质干细胞治疗aGVHD后T细胞亚群的变化作者：房佰俊，宋永平，魏旭东，张伟，曹莹【关键词】间充质干细胞；移植物抗宿主病；CD8+CD28-T淋巴细胞；CD4+CD25+T淋巴细胞　　［摘要］目的：探讨脂肪源间充质干细胞(adultadiposetissuederivedmesenchymalstemcells,AMSC)治疗急性移植物抗宿主病(acutegraftversushostdisease，aGVHD)的机制。方法：3例行异基因造血干细胞移植术后发生aGVHD患者，以每公斤体重2×106个细胞剂量静脉输注AMSC；首先应用尼龙毛柱分离外周血T淋巴细胞，再经CD4或

2、CD8免疫磁珠分选出CD8+或CD4+T淋巴细胞，应用流式细胞术检测发生aGVHD患者使用AMSC前后外周血CD8+及CD4+T细胞亚群的变化。结果：与输注AMSC前相比，输注AMSC后，CD8+T细胞中的CD8+CD28CD25--亚群显著上调，CD4+T细胞中的CD4+CD25+亚群并无明显变化，同时，患者的aGVHD得以有效控制。结论：AMSC治疗aGVHD的作用机制可能与其上调CD8+CD28-T细胞亚群有关,而与CD4+CD25+亚群可能并无直接关联。　　［关键词］间充质干细胞；移植物抗宿主病；CD8+CD28-T淋巴细胞；CD4+CD25+T淋巴细胞　　Changeso

3、fTCellSubsetsafterTreatmentalStemCellsonAcuteGraftVersusHostDisease　　Abstract:ObjectiveToinvestigatethemolecularmechanismoftreatmentesenchymalstemcells(AMSC)onacutegraftversushostdisease(aGVHD)patients.MethodsAdoseof2×106AMSCperkgoftheaGVHDpatients'n,thenCD8+orCD4+Tcellsagicbeads，respectively,

4、thentheproportionofCD8+CD28-TcellsorCD4+CD25+Tcellsatopoieticstemcelltransplantation,respectively.ResultsThedataofFACSindicatedthatintheCD8+Tcells,CD8+CD28-Tcellsenthadnosignificantchange.Atthesametime,apleteremissionofaGVHDdiseaseechanismforthesuccessfultreatmentightbecorrelatedalstemcell;GVH

5、D;CD8+CD28-Tlymphocyte；CD4+CD25+Tlymphocyte　　骨髓间充质干细胞能有效防治严重急性移植物抗宿主病(aGVHD)的观点已被血液学界大部分学者所接受［1］。最近,我们从成人脂肪组织中分离出一免疫表型为Flk1+CD31-CD34-的细胞亚群，体外实验证明其具有骨髓间充质干细胞的全部特性［2］，故将其定义为成人脂肪源间充质干细胞(adultadiposetissuederivedmesenchymalstemcells,AMSC)。本研究中，我们使用AMSC治疗3例aGVHD患者，获得满意疗效，并采用流式细胞术检测了3例aGVHD患者AMSC使用

6、前后外周血CD4+及CD8+T细胞亚群的变化，初步探讨了间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSC)在体内参与控制aGVHD的作用机制。　　1　材料与方法　　1.1　AMSC的分离和培养［2］　参照我们实验室已建立方法：抽取适量皮下脂肪组织，剪碎，用DHanks液洗去血细胞，0.2%II型胶原酶消化2h，洗掉胶原酶，用FicollPaque(1.077g/ml)分离液分离得到单个核细胞后，用CD45及GlyA磁珠(MiltenyiBiotec)分选去除CD45+及GlyA+细胞，将阴性选择所得细胞接种在96孔细胞培养板中(每孔1个细胞)，96孔板预先以ECM胶［

7、含5ng/mlBMP4(Sigma),30ng/mlSCF(Sigma)及3%FCS(Gibco)］铺板。20天后，挑取单克隆细胞，扩增备用。扩增培养液成分为：40%MCDB(Gibco)，56%DF12(Gibco)，4%FCS(Gibco)，20ng/mlIL6(Sigma)。　　1.2　病例　病例1，女性，43岁，确诊慢性粒细胞白血病(慢性期)1年后行同胞间HLA全相合外周造血干细胞移植,GVHD预防按常规方法进行，即环胞霉素A(CsA，3mg/kg/d，-5天