川芎嗪对成体大鼠脑缺血再灌注损伤后海马齿状回细胞增殖的影响论文

川芎嗪对成体大鼠脑缺血再灌注损伤后海马齿状回细胞增殖的影响论文

ID:25561425

大小:56.00 KB

页数:6页

时间:2018-11-21

川芎嗪对成体大鼠脑缺血再灌注损伤后海马齿状回细胞增殖的影响论文_第1页
川芎嗪对成体大鼠脑缺血再灌注损伤后海马齿状回细胞增殖的影响论文_第2页
川芎嗪对成体大鼠脑缺血再灌注损伤后海马齿状回细胞增殖的影响论文_第3页
川芎嗪对成体大鼠脑缺血再灌注损伤后海马齿状回细胞增殖的影响论文_第4页
川芎嗪对成体大鼠脑缺血再灌注损伤后海马齿状回细胞增殖的影响论文_第5页
资源描述:

《川芎嗪对成体大鼠脑缺血再灌注损伤后海马齿状回细胞增殖的影响论文》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库

1、川芎嗪对成体大鼠脑缺血再灌注损伤后海马齿状回细胞增殖的影响论文祁存芳,刘勇,田玉梅,张建水,陈新林,张蓬勃,邱芬,肖新莉.freelethylpyrazine,TMP)对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马齿状回(dentategyrus,DG)细胞增殖的影响。方法成年雄性SD大鼠行2h大脑中动脉阻塞手术,术后2h开始腹腔注射TMP/40mg/(kg·d)/。手术后腹腔注射5溴脱氧尿核苷(5bromodeoxyuridine,BrdU),末次注射24h后处死动物,免疫组化染色观察TMP对脑缺血再灌注损伤后DG细胞

2、增殖的作用。结果正常组和假手术组在DG有少量BrdU阳性细胞,对照组缺血后1d阳性细胞开始增加,14d达到高峰(P0.05),TMP治疗组缺血后1d损伤侧BrdU阳性细胞数开始增加,7d达高峰(P0.05)。结论TMP能促进缺血再灌注损伤大鼠海马齿状回内源性神经干细胞增殖。【关键词】脑缺血再灌注;海马齿状回;细胞增殖;川芎嗪近年来,成体动物大脑存在神经元再生现象已被公认,神经元再生研究改变了脑损伤不可修复的传统观念。大量实验证明,脑缺血损伤能够刺激成体动物齿状回(dentategyrus,DG)及侧脑室新生

3、神经元的数目增加,并且这些新生的神经元可从DG颗粒细胞下层迁移至颗粒细胞层,或从侧脑室室管膜下层迁移至嗅球13。最近的研究还发现急性缺血缺氧脑损伤后内源性神经干细胞的活化可导致海马CA1区锥体细胞的大量再生4,这些结果已被看作是神经前体细胞增殖并向损伤区域迁移,从而修复脑损伤的证据。川芎嗪(TMP)为中药川芎的提取成份,被广泛应用于心、脑血管闭塞性疾病,研究表明TMP对脑缺血后脑损伤有保护作用56。但是,TMP是否影响脑缺血再灌注损伤后的神经干细胞增殖还不清楚。本实验观察TMP对成体大鼠脑缺血再灌注损伤

4、后DG细胞增殖的影响,初步探讨脑损伤后神经发生和脑功能自身修复的机制。1材料与方法1.1实验动物成年健康、雄性SD大鼠,体重260-300g(西安交通大学医学院实验动物中心提供)。将动物随机分为TMP治疗组、对照组、假手术组、正常组,TMP治疗组和对照组按缺血后再灌注时间点分为1、3、7、14、21d5个亚组,每组6只动物。1.2药品与试剂川芎嗪注射液(40mg/2mL,无锡市第七制药厂生产),5溴脱氧尿嘧啶(BrdU,.freela公司),大鼠抗BrdU抗体(sigma公司);SABC试剂盒(武汉Bos

5、ter公司),DAB显色剂(sigma公司),其他试剂均为国产分析纯。1.3大脑中动脉阻塞模型制作采用ZeaLonga法7制作大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,并加以改进。选用3.0的单股尼龙手术缝线,将阻塞端灼烧成梭形。按手术步骤暴露右侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉,从颈外动脉插线,栓塞右侧大脑中动脉。线栓深度距颈总动脉分叉约(17.0±1.5)mm,假手术组除不插线外其他步骤相同。线栓保留2h后,小心拔除至颈总动脉分叉处恢复血流。观察模型大鼠清醒后的行为学改变,按ZeaLonga五级四分法评定动物神经功能,

6、本实验将第1、2、3级大鼠确定为成功模型。1.4BrdU标记及TMP给药方法根据文献报道8,将BrdU溶于生理盐水中配制成10g/L的溶液,处死动物前1d腹腔注射(50mg/kg),隔4h1次,共3次。TMP治疗:术后2h开始TMP腹腔给药(40mg/kg),1次/d,至处死动物前1d。正常组、假手术组、对照组给予等量生理盐水注射。1.5神经功能缺失体征评分参考ZeaLonga的方法在大脑中动脉阻塞(middlecerebralarteryocclusion,MCAO)术后不同时间点用单盲法进行5分制评分

7、。0分:无明显神经病学症状;1分:不能完全伸展左侧前爪;2分:向左侧旋转;3分:行走时向左侧倾倒;4分:不能自行行走。1.6BrdU免疫组化染色大鼠经心脏灌注法固定后,取出脑组织,置40g/L多聚甲醛(pH7.6)中固定过夜,切取距前囟-2.4mm、-5.6mm冠状位脑块,石蜡包埋。自前向后行石蜡切片,片厚6μm,隔99取2,每个脑共取10张切片行免疫组化染色。简要步骤如下:切片常规脱蜡、复水,微波加热修复抗原,3%(体积分数)H2O2处理,1%(体积分数)Triton×100处理30min,2mol/LH

8、Cl变性处理30min,正常牛血清封闭后用大鼠抗BrdU抗体(1∶1000)4℃下湿盒内孵育24h;生物素化羊抗大鼠IgG抗体(1∶100)室温2h;复合SABC工作液室温30min;各步骤之间用0.01mol/LPBS冲洗,DAB显色,常规脱水、透明、封片。1.7细胞计数方法每只大鼠随机选取6张非连续的脑片,用Motic图像分析系统对两侧海马齿状回BrdU阳性细胞进行计数,在高倍镜下计数不重复4个视野BrdU阳

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。