大鼠实验性牙移动过程牙周组织中ⅰ型胶原的表达变化

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1、大鼠实验性牙移动过程牙周组织中Ⅰ型胶原的表达变化【摘要】【目的】研究正畸力作用下大鼠牙周膜中Ⅰ型胶原的表达变化，探讨正畸牙移动过程中牙周组织的改建机理。【方法】利用SD雄性大鼠建立实验性牙移动模型，采用免疫组织化学染色技术分别观察了大鼠牙周膜中Ⅰ型胶原在机械力刺激下的免疫阳性表达变化及相互关系。【结果】大鼠牙齿加力后，实验组与对照组牵张区之间的染色统计学上具有显著性差异（P<0.05），两实验组压缩区与牵张区染色强度差异有统计学意义（P<0.05），牵张区染色强度明显高于压缩区。牵张区1～3d开始强表达，一直持续到14d；压缩区1

2、d后开始表达减弱，7d后开始回升。另外发现相当于50～150g质量的正畸力对大鼠牙周组织无明显破坏。【结论】机械力作用下，大鼠牙周膜Ⅰ型胶原代谢发生变化:牵张区表达增强，压缩区表达减弱，且与时间密切相关。相当于50～150g质量的机械力范围是正畸用力的安全范围。【关键词】正畸牙移动；Ⅰ型胶原；免疫组织化学1材料和方法1.1动物模型的建立选取（200±20）g的8周龄健康雄性SD大鼠共56只，随机分为七个时间组，每组8只，根据临床常用的正畸力值将各组进一步分成轻加力（50g）组、重加力（150g）组（按同等质量的重力牵引）每小组4只。采用盐酸氯

3、胺酮（4mL/L）肌注麻醉。将大鼠一侧上颌第一磨牙和前牙间用结扎丝拴正畸用Ni-Ti螺旋弹，测力计测力，建立不同大小正畸力作用下的牙移动模型。对侧未做处理的磨牙作为对照。分别于加力后3、6、12、24h和3、7、14d定期处死。1.2标本的制备固定与脱钙：按相应时间段将大鼠肌注麻醉，40g/L多聚甲醛左心室灌注处死。解剖上颌骨，保留上颌第一磨牙及周围组织，多聚甲醛溶液固定12h。19g/LEDTA（pH7.4）脱钙液中脱钙30d。洗净脱钙液，梯度酒精脱水，石蜡包埋。组织切片厚度控制在5μm，裱于玻片（含20g/LAPES的纯丙酮液处理）上。1

4、.3免疫组织化学染色大鼠的上颌骨冰冻切片，常规LSAB法。主要试剂：第一抗体：兔抗大鼠Ⅰ型胶原多克隆抗体Boster公司（BA0352;正常山羊血清工作液(中山公司SP9001);第二抗体：生物素化羊抗兔IgG(中山公司SP9001);辣根酶标记链霉卵白素工作液(中山公司SP9001);胰蛋白酶（Trypsin）(Difco88-03-28);DAB显色液(Sigma公司5627)。阴性对照试验：①空白对照,用0.01mol/LPBS(pH7.4)取代一抗;②血清对照,用正常羊血清取代一抗。1.4统计学处理为保证实验结果的可比性，不同组采集的

5、样本均保存至同一时间，由同一实验员在相近时间段和相同条件下进行免疫组化染色。采用Image-ProPlus图像分析软件对各组牙周膜染色强度进行测量，分析操作由同一实验员在同一时间内采用统一标尺测得，测量次数为3次。在牵张区和压缩区牙周膜根中下1/2区随机选择三个视野，测量其积分光密度值（IOD值），采用SPSS10.0统计软件，将结果进行t检验和双因素方差分析，并采用LSD法进行验后多重比较（PostHocMultipleparisons）。2结果在未加力正常对照组，Ⅰ型胶原呈束状排列，整齐一致、无断裂，染色均匀，主要在细胞间质着色（图1Ａ）

6、。实验组压缩区，Ⅰ型胶原纤维排列紊乱，染色不均，3d后压缩侧可见明显的骨吸收陷窝和多核破骨细胞（图1Ｂ）。实验组牵张区，Ⅰ型胶原束明显增宽，胶原纤维排列整齐（图1Ｃ）。实验组与对照组牵张区之间的染色统计学上具有显著性差异（表1）,但实验组压缩区与对照组压缩区之间，两对照组压缩区与牵张区之间染色强度统计学上无显著性差异。两实验组压缩区与牵张区染色强度统计学上有显著性差异，牵张区染色强度明显高于压缩区，并与时间有关（表1）：在牵张区实验组加力后3、6h的Ⅰ型胶原染色强度与对照组比较无明显差异；12h、1d开始染色阳性反应信号逐渐增强，第3天达到高

7、峰，第7天、14天的染色阳性信号强度仍高于对照组，但开始逐渐下降。而在压缩区实验组加力第1天的Ⅰ型胶原染色强度开始降低，到第7天，染色强度开始逐渐回升。(责任编辑：admin)3讨论牙移动过程中，牙周膜韧带是最先受力发生改变的组织，牙周膜的动态改建是牙周膜受正畸作用力产生反应的结果，而牙周膜结构的完整性是牙周组织健康的重要保证，是决定正畸治疗效果和稳定性的关键。曾有学者将正畸力作用下牙周膜的生理反应活动看作是伤口愈合过程，因为它同瘢痕修复一样包括细胞外基质结构的再生和重建过程。他们发现高速率的胶原代谢是其显著特征，随刺激时间的延长，胶原的表达

8、呈时间依赖性（time-dependent）变化[5,6]。牙周膜韧带和细胞外基质纤维的主要成分中都包含多种类型的胶原成分[7]，到目前为止，在牙周组织中已发现的胶