液相芯片技术一步反应法联合定量测定人血清cea、afp和tpsa

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1、液相芯片技术一步反应法联合定量测定人血清CEA、AFP和tPSA【摘要】目的建立用液相芯片技术同时定量测定人血清中癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和总前列腺特异性抗原（tPSA）水平的一步反应法，并对该方法进行评价。方法制备抗体交联微球及生物素标记抗体，用双抗体夹心法测定临床血清标本。结果联合测定CEA、AFP和tPSA的线性范围分别为0.063～200ng/ml、0.052～66.6ng/ml、0.016～20ng/ml；最低检测限分别为31.3pg/ml、26.0pg/ml、7.8pg/ml；批内精密度<10%，批间精密度<

2、14%；血清标本CEA、AFP和tPSA检测值与化学发光免疫分析法（CLIA）测值的相关系数为0.920～0.940，与液相芯片两步反应法测值的相关系数为0.952～0.979。该方法仅需1μl标本，2h即可完成检测。结论液相芯片一步反应法具有高通量、检测范围广、灵敏度高、重复性好、节省样品和时间等优点，具有较大临床应用潜力。【关键词】液相芯片；Luminex；肿瘤标志物【Abstract】ObjectiveToestablishaonestepassaytosimultaneouslyquantifycarcinoembryonicantig

3、en(CEA),alphafetoprotEin(AFP)andtotalprostatespecificantigen(tPSA)inhumanserumusingmultiplexedLuminexassayandevaluateitsassayperformance.MethodsAntibodyconjugatedmicrospheresandbiotinylateddetectionantibodiesmunoassayeasurethelevelsofCEA,AFPandtPSAinclinicalserumsamples.Resu

4、ltsThelinearrangeforthemeasurementofCEA,AFPandtPSAl,0.052～66.6ng/ml,0.016～20ng/ml,respectively.TheloitofCEA,AFPandtPSAl,26.0pg/ml,7.8pg/ml,respectively.TheintraandinterassaycoefficientsofvariationeasurementofCEA,AFPandtPSAiluminescenceimmunoassay(CLIA),and0.952～0.979paredin

5、exassay.Inaddition,only1microliterofserumand2hoursultiplexingandhighthroughput,goodreproducibility,increaseddetectionrangeandsensitivity,theonestepLuminexassayinex；tumormarkers肿瘤标志物在肿瘤的临床诊断和治疗中占有重要地位。由于数种肿瘤标志物联合检测对肿瘤的早期诊断及疗效监测更具价值，而同时检测多项指标依靠传统检测手段无法实现，因此在实际工作中亟需一种能够同时完成多指标

6、检测的新型试剂。液相芯片是一种新型生物芯片技术平台，它在不同荧光编码的微球上进行抗原抗体及核酸杂交反应，通过两束激光分别检测微球编码和荧光信号以达到定性和定量分析目的。除了具有快速、灵敏、灵活、准确等显著特点外，液相芯片的最大优势在于高通量，即可同时对同一样本中多达100种目的分子进行分析［1］。作者已应用液相芯片技术建立了联合检测人血清中癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和总前列腺特异性抗原（tPSA）水平的两步反应法（即第一步在标准品或血清标本孔中仅加入稀释微球混合液孵育60min，待抽滤、洗涤后再加入生物素标记抗体混合液继续第二步孵育

7、60min，研究待发表），为进一步缩短检测时间和简化操作步骤，本研究中作者采取一步反应法同时定量测定了人血清CEA、AFP和tPSA水平，评价了该方法的检测范围、最低检测限、精密度等指标，并将用该方法得到的临床血清标本检测值与化学发光免疫分析（chemiluminescenceimmunoassay，CLIA）和液相芯片两步反应法的测值进行了相关性分析。1材料与方法1.1材料和仪器所有单克隆抗体均购自芬兰Medix公司，抗原均购自美国Biodesign公司，羧基化微球购自美国Luminex公司，多孔滤膜板（MultiScreenMABVN1.2μ

8、m）和真空抽滤装置购自美国Millipore公司，BioPlex检测系统购自美国BioRad公司。CEA/AFP、tPSA阴性和阳性