用液相芯片技术定量测定人血清cea、afp和hbsag

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1、用液相芯片技术定量测定人血清CEA、AFP和HBsAg陈玮，李明，吴英松，李妙艳，何蕴韶【摘要】　　【目的】采用液相芯片技术同时定量测定人血清中癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和乙肝表面抗原（HBsAg），并对该方法进行评价。【方法】制备抗体交联微球及生物素标记抗体，用双抗体夹心法对临床血清标本进行测定。【结果】同时检测CEA、AFP和HBsAg时的线性范围分别为0.032～200ng/mL、0.022～55U/mL、0.26～1000ng/mL，最低检测限分别为8.90pg/mL、0.013U/mL、0.24ng/mL

2、，批内变异系数（CV）<9%，批间CV<14%。检测CEA、AFP、HBsAg的灵敏度分别为96.4％、95.8％、92％，特异度分别为95.6％、94.2％、100％，准确度分别为96％、95％、96％。其检测结果与化学发光免疫分析法（CLIA）或时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）之间呈显著的等级相关关系。该方法仅需1?滋L标本，3h即可完成检测。【结论】液相芯片技术具有可联合检测多项指标、高通量、线性范围广、灵敏度高、重复性好、节省样品和时间等优点，具有临床应用潜力。【关键词】液相芯片；微球悬浮阵列技术；Lu

3、minex；肿瘤标志物；乙型肝炎表面抗原Abstract:【Objective】Tosimultaneouslyquantifycarcinoembryonicantigen(CEA),alphafetoprotein(AFP),andhepatitisBsurfaceantigen(HBsAg)inhumanserumusingmultiplexedLuminexassayandevaluatetheassayperformance.【Methods】Biotinylateddetectionantibodiesandmic

4、rospherescoupledmunoassayeasurethethreeanalytesinserumsamples.【Results】LinearrangesL,0.022～55U/mL,0.26～1000ng/mL,anddetectionlimitsL,0.013U/mL,0.24ng/mLforCEA,AFP,andHBsAg,respectively.Theintra-andinter-assaycoefficientsofvariationanrankcorrelationsinexassayandbyche

5、miluminescenceimmunoassay(CLIA)ortime-resolvedfluorescenceimmunoassay(TRFIA).Only1microliterofserumand3hoursinexassay.【Conclusion】edSci),2007,28(1):105-109；114]肿瘤标志物对于肿瘤普查、诊断、分期、疗效监测及预后判断等具有重要价值，临床上常联合检测多种标志物以提高肿瘤诊断的阳性率和特异性，但目前常用的检测手段如放射免疫测定、酶联免疫测定、化学发光法等仅能单独检测。液相芯片

6、是一种新型生物芯片技术平台，它在不同荧光编码的微球上进行抗原-抗体及核酸杂交反应，通过两束激光分别检测微球编码和荧光信号以达到定性和定量分析目的。除了具有快速、灵敏、灵活、高通量等显著特点外，液相芯片最大优势在于可同时对同一样本中多达100种不同目的分子进行分析[1]。本研究应用液相芯片技术利用双抗体夹心免疫分析原理同时检测了人血清中的癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和乙肝表面抗原（HBsAg），评价了该方法的线性范围、最低检测限、精密度、灵敏度、特异度、准确度等指标，并对检测结果与化学发光免疫分析法（chemilumi

7、nescenceimmunoassay，CLIA）和时间分辨荧光免疫分析法（time-resolvedfluorescenceimmunoassay，TRFIA）进行了相关性分析。1材料与方法1.1材料和仪器单克隆抗体购自芬兰Medix公司和美国Fitzgerald公司，癌胚抗原（CEA）和甲胎蛋白（AFP）抗原购自美国Biodesign公司，重组乙肝表面抗原（HBsAg）购自上海精睿生物科技有限公司。羧基化微球购自美国Luminex公司。牛血清白蛋白（BSA）购自美国Fitzgerald公司。2-吗啉乙磺酸(MES)、N-羟

8、基硫代琥珀酰亚胺（Sulfo-NHS）和生物素-N-羟基琥珀酰亚胺酯购自美国Sigma-Aldrich公司。碳二亚胺（EDC）购自美国Pierce公司。藻红蛋白标记的链霉亲和素（SA-PE）购自美国MolecularProbes公司。带滤膜离心管、MultiScreenMAB