ut受体拮抗剂――urantide抗大鼠心肌缺血再灌注损伤作用及其机制 (1)

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1、MImyocardialinfarction心肌梗死minminute分钟MTT3-4,5-dimethylthiazol-2-thiazolyl)-2,5-diphenylterazoliumbromide四甲基偶氮唑蓝NOnitricoxide一氧化氮NOSnitricoxidesynthase一氧化氮合酶NSnormalsaline生理盐水ODopticaldensity光密度值OFRoxygenfreeradical氧自由基PBSphosphatebufferedsaline磷酸缓冲液PCRpolymerasechainreaction聚合酶链式反应P

2、KCproteinkinaseC蛋白激酶CPVDFpolyvinylidenedifluoride聚偏二氟乙烯rpmrevolutionsperminute每分钟转数RT-PCRreversetranscription-polymerasechainreaction逆转录-聚合酶链反应SDSsodiumdodecylsulphate十二烷基硫酸钠SODsuperoxidedismutase超氧化物歧化酶SDS-PAGEsodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectropheresis十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳TBS

3、tris-buffersolutionTris盐酸缓冲液TEMtransmissionelectronmicroscope透射电子显微镜TEMEDN,N,N’,N’-tetramethylenediamine四甲基乙二胺TTC2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride氯化三苯基四氮唑TUNELterminaldeoxynucleotidyltransferasedUTPnickendlabeling原位末端脱氧核苷酸转移酶标记UⅡurotensinⅡ尾加压素ⅡUraurantideVerverapamil维拉帕米4UT受体拮抗剂――u

4、rantide抗大鼠心肌缺血再灌注损伤作用及其机制摘要心血管疾病是严重危害人类生命健康的常见病和多发病，具有很高的死亡率。缺血性心脏病是其中最常见的疾病之一，表现为心肌急剧的缺血缺氧。近年来随着动脉搭桥术、溶栓疗法、经皮腔内冠脉血管成形术、体外循环心脏外科手术和心肺脑复苏术等手段的建立和推广应用，能够使缺血的心脏很快恢复血液供应，但同时也发现在心肌缺血基础上恢复血流后，组织损伤加重、甚至发生不可逆性损伤的现象称为心肌缺血再灌注损伤。因此，开发预防和治疗心肌缺血再灌注损伤的有效药物是国内外医药界关注的热点。UrotensinⅡ（UⅡ）是一种生长激素样神经环肽，最

5、初从硬骨鱼脊髓尾部分离出来，后来发现在哺乳动物包括人类都普遍存在UⅡ，其广泛分布于脊髓、脑组织和心血管组织。1999年发现UⅡ的特异性受体－－UT受体。已证实人类UⅡ（humanUⅡ）是迄今已知最强的血管收缩剂，作用强度较ET-1高出1~2个数量级。临床多项研究也显示，在多种心血管疾病中伴有hUⅡ水平的升高，提示hUⅡ及其受体在心血管疾病中可能有着举足轻重的作用。Urantide是在hUⅡ基础上衍生的肽类UT受体拮抗剂。本课题组前期研究初步表明，urantide对心肌缺血及缺血再灌注损伤具有保护作用，其机制可能与减轻细胞膜脂质过氧化、增加NO生成、减轻钙超载等

6、有关。本研究将分别从整体水平、细胞水平探讨urantide对缺血再灌注大鼠心脏、缺氧再给氧大鼠心肌细胞的保护作用及其机制，重点利用RNA干扰技术下调UT受体表达，在心肌细胞缺氧再给氧模型基础上，探讨urantide对缺氧再给氧心肌细胞保护作用与UT受体之间的关系。5第一部分Urantide对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及相关机制研究目的：观察urantide对缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响及其机制，并应用PKC-TK-MAPK信号通路特异性抑制剂白屈菜红碱（CHE）和PI3K-AKT信号通路特异性抑制剂LY294002，重点探讨urantide对缺血再灌注大鼠心

7、肌细胞保护作用与上述两条信号通路的作用机制。方法：1.采用大鼠冠状动脉左前降支结扎和松开法（LAD法）制作大鼠缺血再灌注模型，记录心肌缺血/再灌注过程中各组心电图，比较ST段变化情况；在实验结束后，收集各组大鼠血清待测生化指标。2.实验共分8组，分别是：（1）假手术组；（2）模型组；（3）Urantide3μg·kg-1组；（4）Urantide10μg·kg-1组；（5）Urantide30μg·kg-1组；（6）Verapamil（Ver）1.6mg·kg-1组；（3~6组分别于缺血前10min舌下静脉1min内一次性推注相应药物）；（7）Urantide

8、30μg·kg-1+CHE（Chele