阿魏酸乙酯抗adp诱导的血小板聚集及其机制论文

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1、阿魏酸乙酯抗ADP诱导的血小板聚集及其机制论文.freelLL-1聚乙二醇为对照，用TYXN-91智能血液凝集仪观察血小板聚集率，激光共聚焦显微镜观察血小板细胞聚集时细胞内钙离子的变化情况.结果不同终浓度（0.1，0.5，1.5和3.0mmolL-1）的阿魏酸乙酯对ADP诱导的血小板聚集抑制百分数分别为（%）26.3±3.3，33.4±2.4.freeloscillations.METHODSToobserveplateletcongregaterateinducedbycongregaterTYXN-91.200mLL-1polyethyleneglycol

2、400ascontral.PlateletintracellularcalciumoscillationmolL-1），significantlyincreasedthanthatofthegroupofferulicacid，thechangeofΔFI4.6±1.7ismuchlouchmorethanthatofferulicacid.0引言阿魏酸是多种中药的有效单体成分，具有多种药理作用［1，2］.由于阿魏酸分子结构中的烷烃链较短，分子亲水性较强，难以通过生物膜发挥其抗凝血作用.我们从增加分子亲酯性考虑，在其烷烃链上增加酯键，合成了阿魏酸乙酯.初步验证

3、其生物活性强于阿魏酸，进一步观察其对血小板细胞内钙离子浓度的影响，发现阿魏酸乙酯可抑制由ADP诱导的细胞内钙离子升高，进而抑制血小板的集聚.1材料和方法1.1材料①阿魏酸系上海化学试剂一厂产品;阿魏酸乙酯系第四军医大学药理学教研室提供;Flu-o3-AM:用美国分子探针公司生产的;二磷酸腺苷（ADP）购自美国Sigma公司.其他试剂均为国产分析纯试剂.②TYXN-91智能血液凝集仪为上海通用机电技术研究所生产;MRC-1024激光共聚焦系统为美国Bio-Rad公司生产.③新西兰兔8只，雌雄不拘，体质量（2.5±0.2）kg，第四军医大学动物中心提供.1.2方法

4、1.2.1血小板血浆的制备和聚集性测定将兔戊巴比妥钠ip麻醉后，颈动脉取血，按常规方法制备富含血小板血浆（PRP）和无血小板血浆（PPP）.阿魏酸和阿魏酸乙酯用200mLL-1聚乙二醇溶解，以200mLL-1聚乙二醇为空白对照，PPP调零点.准确吸取PRP0.45mL移入测定皿中，分别加入不同浓度的阿魏酸和阿魏酸乙酯0.05mL，37℃预温3min，加入诱导剂ADP终浓度为12μmoLL-1，用血凝仪测定血小板聚集率.分别记录各组药物不同浓度作用下的血小板聚集曲线，以血小板聚集抑制百分数表示药物的作用强度，即:抑制百分数=对照皿聚集-给药皿聚集对照皿聚集×10

5、0%1.2.2激光扫描共聚焦显微镜观察血小板细胞内［Ca2+］波动在培养皿底部钻一直径约1.5cm的孔，粘上一张超薄载玻片，形成一小皿.玻片用鼠尾胶包被，PRP做血小板计数后，取200μL，3000rmin-1离心10min，去上清，加入10μmoLL-1Flu-o3-AM200μL，37℃孵浴40～50min，3000rmin-1离心10min，去上清加入无钙的HEPES缓冲液200μL吹打使其悬浮，加100μL悬浮液在两个预制的培养皿中，各加入含1mmoLL-1Ca2+的HEPES缓冲液50μL，分别加入终浓度为1mmoLL-1阿魏酸乙酯和等体积的200m

6、LL-1聚乙二醇400，在37℃预热3min，最后加入终浓度12μmolL-1的ADP，在激光扫描共聚焦显微镜下观察单位面积内血小板的钙荧光波动情况.统计学处理:采用SPSS统计学软件包，进行团体t检验.2结果2.1阿魏酸乙酯及阿魏酸对ADP诱导的血小板聚集的抑制作用阿魏酸乙酯及阿魏酸在终浓度为1mmoLL-1时，对ADP诱导的血小板聚集具有抑制作用（Fig1）.阿魏酸乙酯组血小板聚集百分数为76.4%，阿魏酸组为57.2%，且聚集潜伏期延缓也更加明显.这说明阿魏酸乙酯抑制ADP诱导的血小板聚集作用较阿魏酸强.进一步观察不同终浓度的阿魏酸乙酯及阿魏酸，药物的终

7、浓度分别为（0.1，0.5，1.5和3.0mmoLL-1），阿魏酸乙酯组抑制百分数分别为（26.3±3.3，33.4±2.4，73.4±3.1，94.9±2.7）均显著高于等浓度的阿魏酸组（14.7±1.3，21.7±2.1，59.6±2.7，82.3±3.2）（n=8，P0.05，Fig2），且呈量效关系.2.2阿魏酸乙酯对血小板内钙浓度的影响纵座标代表加入ADP后血小板细胞内钙离子荧光强度与开始时刻荧光强度的比值，即钙离子浓度比.横坐标代表钙离子荧光强度随时间变化的过程.对照组加入ADP后，细胞内钙离子浓度波动升高，达到峰值时荧光强度是静息状态ΔFI为10

8、.3±2.6（Fig3）.加入阿魏酸乙