转移性骨肿瘤中cox2, vegf及微血管密度的关系论文

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1、转移性骨肿瘤中COX2,VEGF及微血管密度的关系论文【摘要】目的：探讨转移性骨肿瘤组织中环氧化酶2蛋白(COX2)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达及微血管密度值(MVD)三者的相关性，以明确对转移性骨肿瘤实施临床干预的可能性.方法：采用免疫组化SP法检测42例转移性骨肿瘤手术标本COX2,VEGF蛋白及CD34的表达，根据CD34染色结果应用OLYMPUSVANOX多功能显微镜，采用DMCⅡ型图像分析系统，测定计数MVD值，并同时取原发性恶性骨肿瘤、良性骨肿瘤标本作为对照，探讨COX2和VEGF在转移性骨肿瘤的表达情况，以及转移性骨肿瘤组织中MVD值.结

2、果：COX2及VEGF在转移性骨肿瘤组的阳性表达率分别为62％和81％.freelicrovesseldensity，MVD）的内在联系.1对象和方法1.1对象收集兰州大学第一医院200208/200512原发灶明确且资料完整的转移性骨肿瘤手术切除标本共42(男29，女13)例，平均年龄60.2(36～82)岁.并同时取良性骨肿瘤10例、原发性恶性骨肿瘤标本13例作为对照.所有患者的标本病理诊断均经复检确诊.即用型COX2及VEGF鼠抗人mAb,CD34mAb均购自福建迈新公司.OlympusVANOX多功能显微镜及DMCⅡ型图像分析系统和ImageProplu

3、sv.4.5软件由河南省洛阳正骨医院病理室提供.其它病理仪器和试剂由甘肃省人民医院病理科提供.1.2方法1.2.1标本制备腊块连续切片，厚4μm，一个腊块捞片5～6个，分别为HE染色复检、COX2标记、VEGF标记、CD34标记及阴性对照片或备用.采用免疫组化SP法检测标本COX2,VEGF蛋白及CD34的表达.阴性对照片采用同批PBS为一抗的空白对照片.切片采用OlympusVANOX多功能显微镜及DMCⅡ型图像分析系统和ImageProplusv.4.5软件进行分析；定性分析COX2,VEGF,CD34染色程度及阳性细胞百分比，定量分析肿瘤组织CD34标记的微

4、血管密度.1.2.2VEGF阳性结果判定用已知人低分化胃溃疡侵润性腺癌组织VEGF阳性片为阳性对照（福建迈新编号：MAB0243），阴性对照片采用同批PBS为一抗的空白对照片.骨肿瘤组织VEGF阳性表达主要在细胞胞质内和细胞膜上，染色由浅黄至棕褐色.选择高倍镜视野（×400）视野，判定方法参考Mattern法［2］，按染色深浅分为4级：未见染色为0分（-），染成浅黄即轻度染色为1分（＋），染成棕黄即中度染色为2分（），染成棕褐色即重度染色为3分（）；阳性细胞百分比：未见染色为0分（-），染色细胞25%为1分（＋），染色细胞25%且50％为2分（），染色细胞50%为3

5、分（）；两者积分0～2分判定为阴性，2分为阳性.1.2.3COX2阳性结果判定用已知人肺腺癌COX2阳性片为阳性对照（福建迈新编号：RMA0549）.骨肿瘤组织COX2阳性表达主要在细胞胞质靠近细胞核膜的部位，染色由浅黄至棕褐色.选择高倍镜（×400）视野，判定方法：COX2免疫组化染色以细胞质内出现棕黄色颗粒者为阳性染色.结果评分参照Soslom以下的瘤块生长，实体肿瘤生长直径2mm时即可诱发微血管增殖，肿瘤细胞增殖迅速，瘤体增大，并开始具有潜在的转移倾向.肿瘤血管比正常组织丰富，且是幼稚的血管，其内皮是不完全的，比正常血管的通透性大，十分有利于肿瘤细胞的侵入

6、.因此肿瘤血管在肿瘤的生长、转移过程中起关键性作用.这一结果使得越来越多的学者把目光转向研究肿瘤血管的发生过程.干预肿瘤血管生成是目前肿瘤研究的热点之一，目前恩度已在中国率先研制成功并即将上市应用于临床.A:原发性恶性骨肿瘤标本CD34染色SP×100；B:转移性骨肿瘤标本COX2染色SP×400；C:转移性骨肿瘤标本VEGF染色SP×400；D:转移性骨肿瘤标本CD34染色SP×200.图1原发性恶性骨肿瘤和转移性骨肿瘤标本CD34,COX2和VEGF染色略COX2是前列腺素合成过程中重要的限速酶，催化花生四烯酸转变为前列腺素；后者通过特异性的受体和过氧化酶体增值物

7、激活受体γ途径，活化巨嗜细胞上调VEGF的产生［5］.COX2可抑制多种肿瘤细胞凋亡，抑制免疫应答，逃避免疫监视，促进肿瘤血管生成及转移复发，其表达与肺、结肠、前列腺、乳腺及骨肉瘤等肿瘤的浸润、转移和预后有关［6］.VEGF作用于内皮细胞表面的受体，促进血管的生成.VEGF在胚胎发育过程中高水平表达，在正常生理状态下当血管生成管壁时，呈低水平表达.COX2可能通过诱导VEGF表达而促进肿瘤的新生血管生成，从而促进瘤体的生长.有研究发现COX2可使鼠产生VEGF的能力下降94％，选择性COX2抑制剂可使野生型