外燥对小鼠气管细胞凋亡与bcl

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1、外燥对小鼠气管细胞凋亡与bcl作者：丁建中，龚权，陈刚，李军川，陈庭煊，李侃、【关键词】外燥；,,bcl-2基因；,,bax基因；,,细胞凋亡　　摘要：目的观察外燥对小鼠气管细胞凋亡与bcl-2基因及bax基因表达的影响。方法30只昆明种小鼠随机分为常温常湿组（A组），温燥组（B组），凉燥组（C组），每组10只。经处理后第14天用免疫组化法检测各组气管细胞凋亡率（%）、bcl-2、bax阳性指数（PI，%）、bcl-2/bax累积阳性指数（AI，%）与bcl-2:bax蛋白表达比值。结果3组小鼠气管细胞凋亡率均≤0.3%；B组与C组bcl-2P

2、I与AI均低于A组（P<0.01)，B组、C组气管细胞bcl-2:bax蛋白比值中bax增加。结论外燥致气管细胞bcl-2表达降低、bcl-2:bax蛋白比值改变，bcl-2、bax阳性细胞以气道炎性病灶或纤毛缺损处多见,提示与外燥分子致病机制有关。　　关键词：外燥；bcl-2基因；bax基因；细胞凋亡　　　Abstract：ObjectiveToinvestigateapoptosisandexpressionofbcl-2gene,baxgeneinrespiratoryintraepitheliumofmiceingmicealmi

3、ce),groupB(-drymice),groupC(cool-drymice)，10mice/group.Expressionofbcl-2gene,baxgeneandapoptosiseasuredonthe14thday.ResultsThereongthethreegroups.Bcl-2PIandAIingroupBandCarkedlyreducedpared厚连续切片；3%H2O2甲醇37℃阻断10min，0.1mol/LpH6.0柠檬酸缓冲液微波加热至95℃，加核苷酸/核苷酸转移酶混合液37℃，1h，转换POD37℃，30m

4、in，DAB显色，苏木素复染。结果判断：光镜观察气管上皮细胞核内之棕黄色颗粒为TUNEL染色阳性。高倍镜下随机计数200个细胞，计算：细胞凋亡率(%)=凋亡细胞数/200×100%　　表1各组小鼠“温度－相对湿度－风”处理条件（略）　　1.3.3气管细胞bcl-2基因、bax基因表达检测标本处理同1.3.2。第14天取各组气管经免疫组化法（链酶亲合素-生物素复合物，微波修饰）检测［4］。主要步骤：标本经5%非免疫羊血清封闭后，按免疫组化染色试剂盒说明书进行操作。设磷酸盐缓冲液空白对照和正常兔血清（1∶50）替代（一抗）对照。结果判断：光镜下见气

5、管上皮细胞浆内之棕黄色颗粒为bcl-2（bax）基因表达阳性。高倍镜下计数500个细胞，按下式计算：阳性指数（PI）=（阳性细胞/记数细胞）х100%bcl-2/bax累积阳性指数（AI）=（bcl-2阳性细胞+bax阳性细胞数/1000个记数细胞）×100%bcl-2:bax蛋白比值=baxPI/(bcl-2PI+baxPI)　　1.3.4统计学处理实验数据以±s表示，采用SPSS13.0软件，资料之间比较用ANOVA分析，显着性检验采用多个样本均数间q检验（Nean-Keuls法），P<0.05为差异有统计学意义，检验水准为双侧a=0

6、.05。　　2结果　　外燥对气管细胞凋亡与bcl-2基因、bax基因表达的影响见表2。镜下见三组小鼠气管上皮细胞凋亡率很低（0.15%~0.30%），各组间bax阳性指数差异无显著性（P>0.05）。温燥组第14天bcl-2（bax）阳性细胞多分布于气管纤毛片状缺损处，凉燥组bcl-2（bax）阳性细胞则多为点状分布。温燥组与凉燥组bcl-2阳性指数、bcl-2/bax累计阳性指数低于常温常湿组。温燥组与凉燥组气管细胞bcl-2:bax蛋白比值中bax升高。温燥组、凉燥组气道黏液腺中bcl-2，bax阳性细胞30%，而常温常湿组≤2%（P

7、<0.01）。　　表2外燥对小鼠气管上皮细胞bcl-2基因、bax基因表达与细胞凋亡的影响（略）　　与常温常湿组比较，*P<0.05,**P<0.01　　3讨论　　bcl-2属于低丰度表达基因，仅在增生活跃的细胞中明显转录，编码的bcl-2蛋白是一种膜结合蛋白，定位于线粒体、内质网及核膜上，通过抑制细胞内质网中钙离子释放、调节抗氧化途径、直接或间接与细胞信号传递蛋白（如p53蛋白）作用等调节细胞生长［5］。bcl-2，bax家族的蛋白-蛋白相互作用，对决定一个细胞是否进入凋亡途径至关重要。根据气象学中“候平均气温”“季平均温度

8、”，课题组以表1条件研究显示，外燥致小鼠气管上皮鳞状化生、中性粒细胞浸润等病变，是开展本实验研究的基础。结果显示，小鼠气道4μm完整切片（一圈）的假复