erδe5在乳腺癌组织中的表达及临床意义探讨

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1、ERΔE5在乳腺癌组织中的表达及临床意义探讨作者：华彬　李波　陆旭　肖文政　韦军民【摘要】目的：通过检测乳腺癌和癌旁乳腺组织（乳腺癌标本边缘外5cm）中雌激素受体α（EstrogenReceptor，ERα）剪切变异体ERΔE5表达水平的差异，探讨ERΔE5在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法：培养乳腺癌细胞株ZR-75-1，采用RT-PCR检测目的基因ERΔE5，建立阳性对照体系。以液氮冷冻储存的59例乳腺癌组织和59例癌旁乳腺组织提取目的基因，进行对照实验，检测ERΔE5在乳腺癌组织和癌旁乳腺组织中的表达状况，分析二者的表达差异及其临床意义。结果

2、：在ER阳性乳腺癌标本中，ERΔE5阳性20例（20/44），ER阴性的乳腺癌标本中，ERΔE5阳性6例（6/15），两者差异无统计学意义（P=0.7170）；在人表皮生长因子受体2（humanepidermalgroarkersofbreastcarcinomabydetectingtheexpressionofestrogenreceptorα(ERα)splicingvariantERΔE5inthecarcinomatousspecimenanditsparacarcinomatousbreasttissue.Methods：Theexpre

3、ssionofERΔE5inbreastcarcinomatoustissueanditsparacarcinomatousbreasttissuein59patientsofbreastcancererasechainreaction(RT-PCR).TheRT-PCRamplificationofERΔE5ofbreastcancercellline　　乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,内分泌治疗作为综合治疗的重要组成部分已愈来愈受到重视。1986年发现了第一个雌激素受体（EstrogenReceptor，ERα），随着对其功能认识的深入，业已将

4、乳腺癌分为两大类：激素依赖型和激素非依赖型［１］。目前认为在乳腺癌发生的早期，肿瘤细胞表现为激素依赖性生长，因而可以使用激素拮抗剂进行治疗,但肿瘤细胞会逐渐演变为激素非依赖性生长，产生这种变化的分子机制目前仍不清楚。随着RT-PCR技术和RNA酶抑制剂的使用,1991年前后已在mRNA水平发现了20余种ER的剪切变异体,被认为是乳腺癌激素非依赖性生长的一个可能因素［２］。在这些剪切变异体中，ERΔE5是少数几种功能域阳性的变异体之一。本研究旨在通过检测乳腺癌组织和癌旁乳腺组织中ERα剪切变异体ERΔE5的表达，探讨ERΔE5在乳腺癌临床诊治中的意义。

5、1　资料与方法1.1　一般资料　收集我科乳腺中心2004年4—10月间收治的乳腺癌患者59例，均为女性，年龄31～78岁，平均年龄53岁。均行乳腺癌切除术，以乳腺癌组织为实验组，取肿瘤边缘外5cm的癌旁乳腺组织作为对照组。所有标本均经病理科医师确诊后，立即存放于液氮中冷冻储存（自取材到冷冻储存的时间控制在30min内），直至实验中开始使用。59例乳腺癌标本中ER阳性44例，ER阴性15例，HER-2阳性22例，HER-2阴性37例；临床分期：Ⅰ期19例，Ⅱ期26例，Ⅲ期10例，Ⅳ期1例，未分期3例；病理类型包括浸润性小叶癌1例，黏液癌2例，导管原位癌

6、2例，混合癌10例（其中浸润性导管癌并浸润性小叶癌6例，浸润性导管癌并黏液癌4例），浸润性导管癌44例。1.2　主要试剂与仪器　人乳腺导管上皮癌细胞株ZR-75-1购自中国医学科学院基础所；RT-PCR引物由北京奥科生物技术有限责任公司合成；SuperScriptⅡTMFirst-StrandSynthesisSystemforRT-PCR购自Invitrogen公司；Taq酶、RNA提取剂（Trizol）购自Promega公司；RPMI1640购自GIBCO公司。主要仪器包括倒置显微镜（OLYMPUS,日本）、酶标仪（Bio-Rad，日本）、紫外分

7、光光度仪（PharmaciaBiotech，英国）、台式高速离心机（HERAEUS,德国）、凝胶成像分析仪（Bio-Rad，日本）、恒温恒流电泳仪（北京东方仪器厂）、水浴摇床（EYELA,日本）、CO2培养箱（NAPCO，法国）等。1.3　实验方法1.3.1　细胞培养　以RPMI1640液为培养基（含2mmol/L谷氨酰胺，10%FBS，100U/mL青霉素钠，100U/mL链霉素），于37℃、5%CO2培养箱中培养ZR-75-1细胞株。当细胞铺满瓶时弃去细胞培养液，经适当的处理后采用Promega公司的RNA提取液Trizol提取细胞总RNA。1.

8、3.2　检测RNA质量　取细胞总RNA样品30μg，经适当处置后于65℃变性15min，同时制备1%的琼脂糖