hbv对肝癌细胞中mmp2及nm23表达的影响

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1、HBV对肝癌细胞中mmp2及nm23表达的影响【摘要】目的:研究mmp2和nm23在无HBV表达的人肝癌细胞株HepG2和持续表达HBV的HepG2细胞株（HepG2.215）中的表达及差异，进一步了解HBV在肝癌侵袭转移中的作用.方法:通过免疫细胞化学、:Toinvestigatetheexpressionofnm23andmmp2inHepG2cellsandHepG2.215cellseetastasisofhepatocellularcarcinoma(HCC).METHODS:Theexpressionsofmmp2andnm23protEinsinedbyimmunoc

2、ytochemistryandmp2protEInincreased,andthatofnm23proteindecreasedinHepG2.215cells.CONCLUSION:Theexpressionsofnm23andmmp2proteininHCCmayreflectthemetastasispotentialofhepatocellularcarcinoma.Thereisamarkeddifferenceintheexpressionrateofnm23tommp2beteHBVinfectioncouldinducetheexpressionprofileofme

3、tastasisinhibitors,furthermore,causetheinvasionandmetastasisofhepatocellularcarcinoma.　　【Keys;hepatitisBvirus;HepG2.215；HepG2；neoplasmmetastasis　　0引言　　目前研究认为肝癌在其侵袭、转移的过程中必须具备降解细胞外基质的能力.mmp2与多种肿瘤的浸润侵袭有关［1］.在肝癌侵袭转移过程中，其表达产物不仅可以酶解细胞间基质成分，还能酶解基底膜的主要成分Ⅳ型胶原.而nm23作为第一个被发现的抑癌基因，与多种人类肿瘤的侵袭、转移相关［2］.本实验拟通过研

4、究转移相关基因mmp2与nm23在人肝癌细胞株HepG2和持续表达HBV的HepG2细胞株（HepG2.215）中的表达及差异,进一步阐述HBV在肝癌浸润、转移中的作用.　　1材料和方法　　1.1材料新生牛血清、DMEM低糖培养基购自GIBIO公司.MaxVisionTM快速免疫组化方法二步法检测试剂盒，DAB染色盒购于迈新公司，nm23鼠抗人单克隆抗体，mmp2兔抗人多克隆抗体均购自美国Novus公司，HRP标记的人抗兔单克隆抗体购自北京中山生物技术有限公司，PVDF膜和ECL发光液均购自Pierce公司.其余试剂为国产分析纯级.　　1.2方法　　1.2.1细胞培养人肝肿瘤细胞株He

5、pG2由第四军医大学西京医院病理科提供，持续表达HBV的HepG2细胞株（HepG2.215）由第四军医大学唐都医院传染科提供.HepG2,HepG2.215细胞均为贴壁细胞，用含100mL/L新生牛血清的DMEM低糖培养基在37℃,饱和湿度及50mL/LCO2的细胞培养箱内传代培养.　　1.2.2免疫细胞化学培养细胞于12孔板，处理细胞后4%多聚甲醛固定并透化处理，PBS充分清洗后，100mL/L羊血清封闭，免疫细胞化学检测前采用10g/LTritonX100破膜30min，30mL/LH2O2阻断内源性过氧化物酶20min,分别加入1∶80nm23鼠抗人单克隆抗体及1∶80mmp

6、2兔抗人多克隆抗体后,放置湿盒中，4℃冰箱过夜.其余步骤参照迈新公司免疫组化染色步骤说明书.显微镜下观察细胞并拍照.　　1.2.3免疫印迹（axVisionTM法×400（略）　　2.2mmp2，nm23在HepG2.215及HepG2中蛋白表达差异在HepG2.215细胞中mmp2的蛋白表达较HepG2细胞明显升高，而nm23的蛋白表达较HepG2细胞明显降低（图3，4）.　　A：mmp2;B：nm23.　　图2mmp2，nm23在HepG2肝癌细胞中的表达MaxVisionTM法×400（略）　　图3mp2，nm23在HepG2.215及HepG2中蛋白表达（略）　　bP&l

7、t;0.01vsHepG2.215.　　图4Labimage软件进行统计分析结果图（略）　　3讨论　　浸润和转移是恶性肿瘤的重要特征，也是影响疾病治愈率和预后的主要因素.mmp2与多种肿瘤的浸润侵袭有关，在肝癌以及慢性肝炎肝组织中均表达增强［3］.在肝癌侵袭转移过程中，其表达产物不仅可以酶解细胞间基质成分还能酶解基底膜的主要成分Ⅳ型胶原.研究表明，nm23基因的mRNA水平与肿瘤细胞的转移呈负相关，也是抑制转移的主要分