HBV对肝癌细胞中mmp2及nm23表达的影响.doc

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1、HBV对肝癌细胞中mmp2及nm23表达的影响【摘要】目的:研究mmp2和nm23在无HBV表达的人肝癌细胞株HepG2和持续表达HBV的HepG2细胞株（HepG2.215）中的表达及差异，进一步了解HBV在肝癌侵袭转移中的作用.方法:通过免疫细胞化学、WesternBlot检测两组细胞株HepG2和HepG2.215中mmp2和nm23的表达.结果:肝癌细胞株HepG2.215与HepG2细胞株相比较，其mmp2表达的水平明显升高(P<0.01)，而nm23表达的水平却明显下降(P<0.01).结论:mmp2和nm23的表达水平能反映肝癌

2、的侵袭转移能力.mmp2在HepG2.215中的高表达和nm23在HepG2.215的低表达，可提示长时间的HBV感染可能会改变转移相关基因的表达，且有可能会导致肝癌细胞扩散转移.【关键词】肝肿瘤；肝炎病毒，2型；hepG2.215；hepG2；肿瘤转移　　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetheexpressionofnm23andmmp2inHepG2cellsandHepG2.215cellswhichpersistentlyexpresseshepatitisBvirusbyintegratedHBVgenomewithHepG2

3、,andtofurtherunderstandthefunctionofHBVininvasionandmetastasisofhepatocellularcarcinoma(HCC).METHODS:Theexpressionsofmmp2andnm23proteinsweredeterminedbyimmunocytochemistryandwesternblotintheHCCcelllines.RESULTS:ComparedwithHepG2cells,theexpressionofmmp2proteinincreased,andthatofnm23

4、proteindecreasedinHepG2.215cells.CONCLUSION:Theexpressionsofnm23andmmp2proteininHCCmayreflectthemetastasispotentialofhepatocellularcarcinoma.Thereisamarkeddifferenceintheexpressionrateofnm23tommp2betweentheHepG2.215cellsandHepG2cells.TheresultsindicateapossibilitythatlongtimeHBVinfe

5、ctioncouldinducetheexpressionprofileofmetastasisinhibitors,furthermore,causetheinvasionandmetastasisofhepatocellularcarcinoma.　　【Keywords】liverneoplasms;hepatitisBvirus;HepG2.215；HepG2；neoplasmmetastasis　　0引言　　目前研究认为肝癌在其侵袭、转移的过程中必须具备降解细胞外基质的能力.mmp2与多种肿瘤的浸润侵袭有关［1］.在肝癌侵袭转移过程中，其表达产物不仅可以

6、酶解细胞间基质成分，还能酶解基底膜的主要成分Ⅳ型胶原.而nm23作为第一个被发现的抑癌基因，与多种人类肿瘤的侵袭、转移相关［2］.本实验拟通过研究转移相关基因mmp52与nm23在人肝癌细胞株HepG2和持续表达HBV的HepG2细胞株（HepG2.215）中的表达及差异,进一步阐述HBV在肝癌浸润、转移中的作用.　　1材料和方法　　1.1材料新生牛血清、DMEM低糖培养基购自GIBIO公司.MaxVisionTM快速免疫组化方法二步法检测试剂盒，DAB染色盒购于迈新公司，nm23鼠抗人单克隆抗体，mmp2兔抗人多克隆抗体均购自美国Novus公司，HRP标记的

7、人抗兔单克隆抗体购自北京中山生物技术有限公司，PVDF膜和ECL发光液均购自Pierce公司.其余试剂为国产分析纯级.　　1.2方法　　1.2.1细胞培养人肝肿瘤细胞株HepG2由第四军医大学西京医院病理科提供，持续表达HBV的HepG2细胞株（HepG2.215）由第四军医大学唐都医院传染科提供.HepG2,HepG2.215细胞均为贴壁细胞，用含100mL/L新生牛血清的DMEM低糖培养基在37℃,饱和湿度及50mL/LCO2的细胞培养箱内传代培养.　　1.2.2免疫细胞化学培养细胞于12孔板，处理细胞后4%多聚甲醛固定并透化处理，PBS充分清洗后，100mL

8、/L羊血清