蛙皮素对胆道梗阻大鼠肝脏氧化应激的影响

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1、蛙皮素对胆道梗阻大鼠肝脏氧化应激的影响作者：陆培华时开网刘子君杨坤兴【摘要】目的探讨蛙皮素对胆道梗阻大鼠肝脏氧化应激的影响。方法40只DA、XOD、GSH衡量氧化应激状态，光镜下观察肝脏组织结构。结果胆道梗阻下腔静脉ALT、LPS值升高，肝脏SOD、GSH表达减少，MDA、XOD表达增加，组织炎性细胞浸润较多，肝脏高氧化应激。蛙皮素注射10d，血清ALT、LPS水平及组织炎性细胞浸润减少，肝脏高氧化应激状态降低。结论蛙皮素降低胆道梗阻大鼠肝脏氧化应激，其机制可能与肝脏蛋白激酶C、LPS水平及炎性细胞浸润有关。【关键词】蛙皮素氧化应激胆道梗阻肝脏大鼠Experimentstudyonbomb

2、esinaffectinghepaticoxidativestressanditsmechanisminratsentofGeneralSurgery,FirstHospitalofNanjing,NanjingMedicalUniversity,Nanjing210006,China【Abstract】ObjectiveToevaluatetheeffectandmechanismofbombesin(BBS)onhepaticoxidativestressinratsaleDA,XODandGSH.Meanplesinedhistologically.ResultsALTandLPSu

3、lationinportaltractsinistration,therecouldbeseenreducedALTandcavalendotoxaemia,decreasedneutrophilinfiltrationanddegradedoxidativestressoftheliver.ConclusionBBScandegradeoxidativestressoftheliver,aybeassociatedulation.【Keybesin;Oxidativestress;Bileductligation;Liver;Rats蛙皮素(bombesin,BBS)是一种与人体内胃泌素

4、释放肽的结构和功能都十分相似的14肽物质，具有促进胃肠激素分泌及肠黏膜上皮细胞增殖的作用。近年研究发现其有抗氧化损伤，保护肠道黏膜的作用［1］。高氧化应激也是胆道梗阻肝脏损伤的重要原因［2］。为此我们设计本实验探讨蛙皮素对胆道梗阻肝脏氧化应激的影响。1材料与方法1.1实验动物及试剂DA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.2试剂配制首先用0.1%牛血清白蛋白1ml溶解1mg蛙皮素，然后用含0.25%牛血清白蛋白的生理盐水稀释成200ml，分装后-20℃保存。1.3实验设计大鼠随机分成4组：正常组、假手术组、黄疸组、蛙皮素组，每组各10

5、只。均严格无菌操作，用氯胺酮(50mg/kg)麻醉。取上腹正中切口约2～3cm，解剖肝蒂，假手术组仅游离胆总管后关腹。黄疸组、蛙皮素组在距肝门0.5cm处用40丝线双道结扎胆总管，制成胆道梗阻模型［3］。正常组不作任何处理。术后第1天起，蛙皮素组按3次/d皮下注射10μg/mg蛙皮素溶液0.5ml，正常组、假手术组、黄疸组按3次/d皮下注射生理盐水0.5ml。术后第10天，各鼠留取下腔静脉血约2ml、肝脏约0.5g后，放血使其死亡。1.4检测指标1.4.1谷氨酸氨基转移酶(ALT)、内毒素(LPS)血清ALT值由日本OlympusAU2700全自动生化检测系统检测；LPS水平按凝固蛋白引

6、起的浊度变化进行定量，由北京金山川公司MB80微生物快速动态检测系统检测。1.4.2SOD、MDA、XOD、GSH准确称取肝脏组织0.5g按质量体积比1∶9加入生理盐水，制成10%的匀浆，2500r/min，离心10min，再用生理盐水稀释成0.1%的组织匀浆待测。参照试剂盒说明书，SOD用黄嘌呤氧化酶法，按每毫升匀浆蛋白在1ml反应液中抑制率达50%时对应的SOD量为一个活力单位。MDA通过改良TBA法，定量每毫克肝脏匀浆所含MDA值。XOD用四唑盐比色法，按每克组织蛋白在37℃每分钟转化为1μmol底物所需的酶量为一个酶活力单位。GSH通过与DTNB反应生成一种黄色化合物比色法定量每

7、毫升匀浆中GSH值。处理好的标本用分光光度计检测。1.5光镜切片的制备观察新鲜肝脏组织用福尔马林固定、石蜡包埋、切片、HE染色后显微镜观察肝脏汇管区小胆管数量，炎性细胞浸润及胆管上皮增殖程度。1.6统计学分析实验数据用SPSS11.5统计软件处理，计量资料以±s表示，组间比较以Levene's检验，方差齐性后使用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1一般情况手术顺利，所有大鼠术后第10天存活良