两种ｘ染色质检查方法的比较

《两种ｘ染色质检查方法的比较》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、两种Ｘ染色质检查方法的比较　　【论文关键词】方法；检测；性染色质；比较　　【论文摘要】目的：探讨改进检测X染色质的方法。方法：以在校学生的口腔黏膜细胞为材料，分别用石炭酸复红染液直接涂片法和吉姆萨染液扣染法显示X染色质。结果：石炭酸复红染液染色直接涂片法操作简单，用时短，阳性检测率低；吉姆萨染液扣染法操作稍复杂，用时稍长，阳性检出率高，但由于课堂时间限制，中职学生的课堂教学中不易推广。讨论：应用改进的人类性染色质检测方法，可以准确检出性染色质。　　　　中等职校《医学生物学》实验教学中一直沿用石炭酸复红直接涂片法（以下

2、简称直接涂片法），阳性率不太理想，故近年借鉴改良后的吉姆萨染液扣染法（以下简称扣染法），阳性率明显提高，现将两种方法比较如下。　　　　1实验材料及方法　　　　1．1材料：选择本校一年级汉族女生（16~20岁）20例，取其颊部口腔黏膜细胞为标本。　　1．1．1染色液配制：石炭酸复红染液的配制，A液：碱性复红(basicfuchsin)0．3g，95%酒精10ml，B液：石炭酸5．0g、蒸馏水95ml；将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%酒精，继续研磨使其溶解，配成A液。石炭酸溶解于水中，配成B液，混合A液及B液即成

3、。通常可将此混合液稀释5~10倍使用，稀释液易变质失效，一次不宜多配[1]。　　1．1．2吉姆萨染液的配制：将吉姆萨粉末1g先溶于少量甘油，在研钵内研磨30min以上，至看不见颗粒为止，再将全部(66ml)剩余甘油倒入，于56℃温箱内保温2h。然后再加入甲醇(66ml)，搅匀后保存于棕色瓶中。母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。临用时用pH6.8的磷酸盐缓冲液稀释10倍。固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)，用时现配[2]。　　1．1．3实验所需其他器材：显微镜、载玻片、盖玻片、烧

4、杯、量筒、吸管、牙签、染色缸、擦镜纸、吸水纸、离心机以及盐酸试剂等。　　1．2方法　　1．2．1石炭酸复红染色直接涂片法：用牙签在女性口腔黏膜颊部刮取上皮细胞，均匀涂布于(只能向一个方向涂抹，尽量避免细胞被破坏)载玻片中央部位。应当把细胞核界限清楚的深层上皮细胞用作这些涂片。稍干后，放入3:1的甲醛、冰醋酸固定液中固定30min。固定的标本经水冲洗后，在石炭酸复红染液中染5~10min，再在95％乙醇中分色约半分钟，最后用中性树胶封片、镜检。　　1．2．2吉姆萨扣染法：受检查者用清水漱口后，用牙签轻轻刮取两侧颊部内侧

5、的黏膜，弃去第一次刮取到的黏膜细胞，在同一部位连续刮取数次，将刮取的细胞涮入装有生理盐水3ml的刻度离心管中，以1000r/min离心10min，弃上清液，加入1mol/L盐酸3ml，用吸管将细胞团轻轻打散，制成悬液，37℃解离20min，以1000r/min离心10min，弃上清液。加入新配制的卡诺固定液（甲醇:冰醋酸，V:V=3:1）3ml，用吸管将细胞团轻轻打散，制成悬液，室温下固定10min，再次打散细胞团后，继续固定20min，离心前将细胞打散，以1000r/min离心10min，弃上清液，根据细胞多少加0

6、.1~0.2ml新配制的卡诺固定液，将细胞打散，制成悬液，用吸管取细胞悬液，滴于冰水浸过的载玻片上，自然晾干后染色、镜检。　　1．3计数标准及方法：X染色质位于核膜内缘，是核内惟一浓染的、轮廓清楚的小体，呈小山丘形、扁平形或三角形、圆形等。形态相似但不依附于核膜内缘的不计数，凡核膜缺损、染色过深或细胞上有杂质附着，细胞核重叠等均不做计数；低倍镜下找到细胞集中而又均匀分散的细胞群，油镜下计数100个可计数细胞（可做为计数细胞的是细胞核较大，轮廓清楚完整，无缺损、皱褶，染色清晰。核质呈细网状或均匀的细颗粒状，无深染大颗粒

7、及细菌污染），计算其中X染色质的阳性率。　　　　2结果　　　　2．1直接涂片法结果：制片时间短，约40min，大多数个体细胞被浓染，且背景残留染液杂质较多，污染视野，减少了可计数细胞数量。个体细胞X染色质阳性率为12%~17％。在教学过程中由学生操作时，因主观原因致阳性检出率更低。　　2．2扣染法结果：染色时间较长，95分钟左右，镜下可见细胞轮廓拉清楚，胞核胞浆对比明显，核质均匀，细胞背景材料杂质少，X染色质形态清晰，每个个体X染色质阳性率在17%~20％。　　　　3讨论　　　　X染色质检查可用于判断细胞中X染色体数

8、目，以此鉴定性别及性染色体异常的遗传性疾病。与核型分析相比具有快速、操作简便，所需仪器简单等优点，是比核型分析优先考虑的方法：直接涂片法染色时间短，制片时间短染色过程不易掌控，细胞不是染色过深，就是细胞核与细胞质对比不明显，可能是由于染液浓度过高或是染色时间不适所造成；且背景残留较多杂质，直接涂片致使细胞不易完全分开，有重叠细胞团，由于固定液挥