两种ｘ染色质检查方法的比较论文

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1、两种Ｘ染色质检查方法的比较论文.freell，B液：石炭酸5．0g、蒸馏水95ml；将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%酒精，继续研磨使其溶解，配成A液。石炭酸溶解于水中，配成B液，混合A液及B液即成。通常可将此混合液稀释5~10倍使用，稀释液易变质失效，一次不宜多配1。1．1．2吉姆萨染液的配制：将吉姆萨粉末1g先溶于少量甘油，在研钵内研磨30min以上，至看不见颗粒为止，再将全部(66ml)剩余甘油倒入，于56℃温箱内保温2h。然后再加入甲醇(66ml)，搅匀后保存于棕色瓶中。母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。临用时用pH6.

2、8的磷酸盐缓冲液稀释10倍。固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)，用时现配2。1．1．3实验所需其他器材：显微镜、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、吸管、牙签、染色缸、擦镜纸、吸水纸、离心机以及盐酸试剂等。1．2方法1．2．1石炭酸复红染色直接涂片法：用牙签在女性口腔黏膜颊部刮取上皮细胞，均匀涂布于(只能向一个方向涂抹，尽量避免细胞被破坏)载玻片中央部位。应当把细胞核界限清楚的深层上皮细胞用作这些涂片。稍干后，放入3:1的甲醛、冰醋酸固定液中固定30min。固定的标本经水冲洗后，在石炭酸复红染液中染5~10min，再在95％乙醇中分色约半分钟，最后用中性树胶封片、镜检。1．2．2吉姆萨扣染

3、法：受检查者用清水漱口后，用牙签轻轻刮取两侧颊部内侧的黏膜，弃去第一次刮取到的黏膜细胞，在同一部位连续刮取数次，将刮取的细胞涮入装有生理盐水3ml的刻度离心管中，以1000r/min离心10min，弃上清液，加入1mol/L盐酸3ml，用吸管将细胞团轻轻打散，制成悬液，37℃解离20min，以1000r/min离心10min，弃上清液。加入新配制的卡诺固定液（甲醇:冰醋酸，V:V=3:1）3ml，用吸管将细胞团轻轻打散，制成悬液，室温下固定10min，再次打散细胞团后，继续固定20min，离心前将细胞打散，以1000r/min离心10min，弃上清液，根据细胞多少加0.1~0.

4、2ml新配制的卡诺固定液，将细胞打散，制成悬液，用吸管取细胞悬液，滴于冰水浸过的载玻片上，自然晾干后染色、镜检。1．3计数标准及方法：X染色质位于核膜内缘，是核内惟一浓染的、轮廓清楚的小体，呈小山丘形、扁平形或三角形、圆形等。形态相似但不依附于核膜内缘的不计数，凡核膜缺损、染色过深或细胞上有杂质附着，细胞核重叠等均不做计数；低倍镜下找到细胞集中而又均匀分散的细胞群，油镜下计数100个可计数细胞（可做为计数细胞的是细胞核较大，轮廓清楚完整，无缺损、皱褶，染色清晰。核质呈细网状或均匀的细颗粒状，无深染大颗粒及细菌污染），计算其中X染色质的阳性率。2结果2．1直接涂片法结果：制片时间

5、短，约40min，大多数个体细胞被浓染，且背景残留染液杂质较多，污染视野，减少了可计数细胞数量。个体细胞X染色质阳性率为12%~17％。在教学过程中由学生操作时，因主观原因致阳性检出率更低。2．2扣染法结果：染色时间较长，95分钟左右，镜下可见细胞轮廓拉清楚，胞核胞浆对比明显，核质均匀，细胞背景材料杂质少，X染色质形态清晰，每个个体X染色质阳性率在17%~20％。3讨论X染色质检查可用于判断细胞中X染色体数目，以此鉴定性别及性染色体异常的遗传性疾病。与核型分析相比具有快速、操作简便，所需仪器简单等优点，是比核型分析优先考虑的方法：直接涂片法染色时间短，制片时间短染色过程不易掌控

6、，细胞不是染色过深，就是细胞核与细胞质对比不明显，可能是由于染液浓度过高或是染色时间不适所造成；且背景残留较多杂质，直接涂片致使细胞不易完全分开，有重叠细胞团，由于固定液挥发还致细胞被破坏较多，导致镜检和统计困难。学生在实验课上操作时，制片过程更不够仔细等主观原因致以上情况更严重，阳性检出率更低，据统计为10%~13％。扣染法增加了细胞解离过程，促进细胞松软，能够使细胞充分松散，不重叠；在高倍镜下观察，核质均匀，细胞质与细胞核区分明显，易于统计；固定过程在离心管中进行，减少了固定液挥发而导致的细胞破坏，细胞保持完整，染色时间易于控制，该法还减少染液杂质残留于核内及周围。