橘荔散结丸对子宫肌瘤组织和子宫肌层组织雌激素受体α、β亚型表达水平的影响及作用机理

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1、橘荔散结丸对子宫肌瘤组织和子宫肌层组织雌激素受体α、β亚型表达水平的影响及作用机理.L.编辑。【关键词】子宫肌瘤/中药疗法；橘荔散结丸/治疗应用；受体，雌激素/药物作用临床医学论文咨询qq:1204795366电话0512-5376-9693子宫肌瘤是女性生殖器官中最常见的良性肿瘤，目前研究认为它是一种雌激素依赖性肿瘤，在生育期发生、发展，在绝经后逐渐萎缩，提示雌激素是子宫肌瘤生长的促进剂，而雌激素是通过其两种受体亚型（ERα、ERβ）发挥其生物学效应［1-2］。橘荔散结丸是已故全国著名妇科专家罗元恺教授所创制，临床应用20多年，疗效显著，我们前期研究［3-5］发现该

2、药能明显改善患者临床症状，调控子宫肌瘤组织雌激素受体（estrogenreceptor,ER）、孕激素受体（progesteronereceptor,PR）及PRmRNA的表达。为了进一步探讨其作用机理，明确ERα、ERβ亚型与子宫肌瘤的关系，我们于2007年1月至2008年3月进行了相关临床研究。1资料与方法1.1病例来源参考《女病诊疗全书》［6］中“中药新药治疗子宫肌瘤临床研究指导原则”的诊断、纳入和排除标准，选自2007年1月～2008年3月广州中医药大学第一附属医院妇科行全子宫切除术或子宫次全切术患者共40例，其中在门诊观察治疗服用橘荔散结丸1个疗程（３个月）

3、有手术指征且要求手术者２０例为治疗组，未曾服用中西药物而要求手术者２０例为对照组。治疗组年龄３０～５２岁，平均（４０.７５±７.００）岁；病程1个月～8年，平均（2.17±1.0）年；肌瘤平均体积为（31.69±11.04)cm3。对照组年龄29～52岁，平均（37.9±6.37)岁，病程2个月～5年，平均（2.15±0.96)年；肌瘤平均体积为（26.62±5.80）cm3。两组患者的年龄、病程、肌瘤体积经统计学处理，差异无显著性意义（P＞0.05），具有可比性。1.2治疗方法治疗组：口服橘荔散结丸（药用橘核、荔枝核、川续断、小茴香、乌药、川楝子、海藻、莪术、制首乌

4、、岗稔根、党参、生牡蛎、风粟壳、益母草等，由广州中医药大学第一附属医院制剂室制备），每次6粒，每天3次，以3个月为1个疗程，服用1个疗程后行手术治疗。对照组：未曾服用中西药物而直接行手术治疗。1.3观察指标1.3.1标本收集于术后取瘤体中心组织1.0cm×1.0cm×0.2cm及其周围同样大小的正常肌层组织,用中性福尔马林固定。1.3.2试剂鼠抗人单克隆ERα、ERβ一抗抗体均购自广州威佳科技有限公司;PV6001兔二抗购自北京中杉生物技术有限公司。1.3.3ERα、ERβ检测方法取出中性福尔马林固定的组织标本,石蜡包埋,5μm连续切片后常规脱蜡,流水冲流2min后

5、用3%H2O2消耗内源性过氧化物酶10min,流水冲流后放入pH=6的枸橼酸抗原修复液高压锅中修复5min,待其自然冷却,再用PBS漂洗3次,每次5min,正常血清封闭,室温10min,加入鼠抗人单克隆ERα1∶200,ERβ1∶50，37.8℃反应1h后，加用一抗增敏剂反应30min，再用PBS漂洗3次，每次5min，加入生物素标记二抗，室温20min，用PBS漂洗3次，每次5min，DAB显色5min，自来水冲洗，苏木素浅染色，盐酸分化，氨水返蓝，吹风机封干，中性树胶封固，电镜下计算每100个组织细胞中黄染的细胞数（ERα、ERβ表现为细胞核染色），计为阳性细胞的

6、百分数（ERα、ERβ阳性细胞数）。1.3.4结果判定按染色强度与阳性细胞的百分数判定分4级：不着色为阴性（-）；＜50%细胞着黄色或均着淡黄色为弱阳性（±）；＜50%细胞着棕黄色或＞50%细胞着黄色为阳性（+）；＞50%细胞着棕黄色为强阳性（++）。根据染色强度及阳性细胞所占百分比用组织化学评分（HSCORE）方法计算积分。染色强度自轻到重分为0、1、2、3四级。积分计算分式为：s积分=（i+1）×R；i为染色强度，R为阳性细胞百分数。1.4统计学方法采用SPSS13.0ForWindo..L.编辑。3.2ERα和ERβ的生理机能及其与雌激素的相关性目前有研究［8-

7、9］发现雌激素受体亚型主要有ERα和ERβ两种，为甾体类激素受体超家族成员，是配体依赖的转录因子，分别有其独立的基因编码受体蛋白，其中ERα基因位于染色体6q25.1区，ERα基因敲除小鼠子宫缺乏对雌二醇（E2）的反应性，提示在子宫中ERα起主导作用；ERβ位于染色体14q22-24.1区。ERα和ERβ均含8个外显子，均分为A、B、C、D、E和F6个功能区，其中ER氨基端(NH2)的反式激活功能域(AF1）决定簇位于AB区，它是受体的两个转录激活区之一，具有细胞专一的激活启动子的功能；而羧基端(COOH)是配体结合域和第二反式激活功能域(AF