子宫腺肌病中孕激素受体亚型表达探究

《子宫腺肌病中孕激素受体亚型表达探究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、子宫腺肌病中孕激素受体亚型表达探究【摘要】目的研究子宫腺肌病中孕激素受体亚型的表达，探讨孕激素受体亚型(hPR)在子宫腺肌病发病中的作用机制。方法运用免疫蛋白印迹法(Westernblot)和RT-PCR方法测定子宫腺肌病患者（24例）病灶及其在位内膜及对照组（19例）子宫内膜标本中孕激素受体亚型在蛋白和mRNA水平的表达，计算机图像分析、半定量研究孕激素受体亚型的表达。结果子宫腺肌病异位内膜中hPRs的表达均明显低于在位内膜和对照组，研究组在位或异位内膜中，hPR-A含量均高于hPR-B；而在mRNA水平上则差异无统计学意义(P>0．05)。结论子宫腺肌病异位

2、内膜hPRs蛋白的表达均明显低于在位内膜，而在mRNA水平上却无显著性差异；hPR蛋白的活性可能受转录后调节。�【关键词】子宫腺肌病；人孕激素受体亚型；免疫蛋白印迹法；反转录聚合酶链反应��StudyonexpressionofhumanprogesteronereceptorisoformsinadenomyosisLUXiao-yuan.DepartmentofObstetricsandGynecology,AffiliatedHospitalofXuzhouMedicalCollege,Xuzhou,Jiangsu221002,China7�【Abstra

3、ct】ObjectiveTostudytheexpressionandthemechanismofhumanprogesteronereceptor(hPR)isoformsinadenomyosis.MethodsWesternblotandRT-PCRwereemployedtoinvestigatetheexpressionofhPRisoformsinectopiclesionfromadenomyosisandnormalendometriumfromcontrols.Computerdensitomitrywasusedtostudytherelat

4、iveexpressionofthehPRisoformsatproteinandmRNAlevels.ResultsTheexpressionsofhPRisoformsarelowerinadenomyosisthaninendometrium(P0．05)。�1．2方法�1．2．1标本处理取研究组患者在位子宫内膜和异位病灶组织、对照组子宫内膜组织各0．5g低温（-70℃）冻存。分别行组织蛋白及总RNA的提取。�1．2．2主要试剂和引物小鼠抗人孕激素受体单克隆抗体，北京市肿瘤所免疫室提供；生物素化羊抗小鼠Ig-G，华美生物公司；辣根酶标记链亲和素，中山生物公

5、司；中分子量蛋白标准及DAB显色试剂盒，华美生物公司。Trizol试剂盒，Gibco公司；逆转录酶MML-V，Promega公司；Taq酶，Promega公司；随机引物，Promega公司；dNTP，Boehringere7Mannheim公司；PCR分子量标准，华美生物公司。根据孕激素受体的cDNA序列[2]，应用赛百盛公司的引物设计软件包，设计并合成引物序列如下：hPR-B特异cDNA区域的上、下游引物序列分别为：5-TCATGACTGAGCTGAAGGCAAAG-3、5-GAGCTGTCTCCAACCTTGCAC-3；hPR-A和hPR-B共同cDNA区域

6、的上、下游引物序列分别为：5-TCATGAGCCGGTCCGGGTGCAAG-3、5-CGGGGTGGACGAGGCACAGG-3；内参照β-actin的上、下游引物序列为：5-ATCTGGCACCACACCTTC-3、5-AGCCAGGTCCAGACGCA-3。�1．2．3Westernblot实验将组织蛋白提取液定量测定后，依次行SDS-PAGE电泳、湿式转膜、抗原-抗体反应、显色，用GELDOC1000图像分析系统对条带进行扫描，计算其积分光密度值。�1．2．4RT-PCR实验取组织RNA提取物进行逆转录为cDNA，行PCR扩增反应：hPR-B特异序列的扩

7、增条件：94℃预变性1min；循环条件，94℃变性1min，58℃退火1min，72℃延伸1min，共35个循环；72℃后延伸5min。hPR-A和hPR-B共同序列的扩增条件：94℃预变性5min；循环条件，94℃变性1min，56℃退火1min，72℃延伸1min，共35个循环；72℃后延伸10min。β-actin的扩增条件：94℃预变性6min；循环条件，94℃变性30s，57℃退火40s，72℃延伸40s，共35个循环；72℃后延伸67min。PCR产物分析：6%聚丙烯酰胺凝胶电泳，显色，GELDOC1000图象分析系统对条带进行扫描，计算其积分光密度

8、值。�1．3统计学方法两